调节性T细胞对大鼠肝移植后急性移植物抗宿主病的治疗作用及机制研究

【摘要】：第一部分 间充质干细胞对大鼠肝移植后急性移植物抗宿主病的预防作用及其机制研究 实验目的：急性移植物抗宿主病(LTx-aGVDH)是一种肝移植后严重的并发症,其发病率低(1-2%),但是死亡率却极高,并且缺乏有效的治疗手段。我们在前期研究中已经建立起了大鼠LTx-aGVHD模型,并发现其病情进展同体内调节性T细胞下降有关。间充质干细胞(MSC)具有免疫调节作用,近来已被用于治疗骨髓移植后的GVHD。 材料与方法：大鼠LTx-aGVHD模型建立成功后,于移植后当天至移植后第6天连续注射供体或受体来源的MSC,通过大体表现及病理检测观察大鼠生存情况；通过免疫组化、流式细胞分析等检测大鼠体内调节性T细胞情况；并通过体外MSC同淋巴细胞共培养研究MSC对调节性T细胞的调节作用。 结果：注射供体或受体来源MSC的受体大鼠存活时间显著长于对照组,且长期存活受体未表现出明显的GVHD症状。免疫组化及流式细胞分析显示治疗组受体体内调节性T细胞的数量及比例显著高于对照组。体外MSC同淋巴细胞共培养证实MSC可以诱导调节性T细胞比例上调并抑制效应性T细胞增殖。 结论：在大鼠肝移植模型中,注射供体或受体来源的MSC均可有效预防肝移植后急性移植物抗宿主病的发生。 第二部分 曲古抑菌素A对大鼠肝移植后急性移植物抗宿主病的作用及其机制研究 实验目的：急性移植物抗宿主病(LTx-aGVHD)是肝脏移植后罕见但致命的严重并发症。在前面的研究中我们已经发现LTx-aGVHD病程的进展伴随着调节性T细胞比例的降低。组蛋白去乙酰化酶抑制剂被发现可以促进调节性T细胞的产生,而如异羟戍酸(SAHA)、曲古抑菌素A(TSA)这些组蛋白去乙酰化酶抑制剂已经用于治疗自身免疫性疾病,包括骨髓移植后的移植物抗宿主病。 材料与方法：大鼠LTx-aGVHD模型建立成功后,于移植后第8天至第14天连续注射TSA,通过大体表现及病理检测观察大鼠生存情况,通过PCR、Western Blotting、流式细胞分析等检测大鼠体内调节性T细胞情况；并通过体外培养脾脏T淋巴细胞研究TSA对LTx-aGVHD治疗的作用机制。 结果：经TSA治疗后的大鼠均发生了典型的LTx-aGVHD症状,并最终死亡。经TSA治疗后的大鼠外周血单个核细胞中的调节性T细胞比例略有上调,然而体内外结果均证实TSA可显著降低Foxp3蛋白及mRNA的表达水平。体外研究进一步发现,TSA会损伤T细胞增殖能力以及炎性细胞因子的产生能力。结论：TSA不能缓解LTx-aGVHD的症状,这可能是由于其会下调调节性T细胞。