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应用PDTT裸鼠移植瘤模型评价埃可替尼对胰腺癌治疗效用的临床前研究

何奎锋  
【摘要】:胰腺癌是所有恶性实体肿瘤中预后最差的肿瘤之一,其每年死亡率几乎与其发病率相当。虽然近年来,不断地新药研发与应用给肿瘤治疗结局带来了显著的改观,胰腺癌并没有像乳腺癌、大肠癌那样,获得明显的生存改善,其治疗仍然是肿瘤界一大难题。理论上,手术切除可以达到根治胰腺癌的目的,但胰腺癌由于解剖位置与生物学行为特殊,大多数病人诊断时已为晚期,不能行根治性手术治疗,而即使手术切除,其中又有不小一部分病人会复发,所以,内科药物治疗的进步是提高胰腺癌预后最重要的手段。虽然不计其数的药物在治疗各种肿瘤中展示了可喜的疗效,到目前为止,能用于胰腺癌治疗药物屈指可数,唯一公认的化疗药物只有吉西他滨,靶向药物只有厄洛替尼(erlotinib)。努力为治疗胰腺癌寻找有效的新药,是当前胰腺癌治疗领域关键性的行动。 和厄洛替尼类似,埃克替尼是-EGFR特异性的酪氨酸激酶抑制剂,目前,其已被证明能延长非小细胞肺癌的生存,并已经在我国获得批准用于非小细胞肺癌的治疗。从其生物学特征及临床经验推断,埃克替尼极有可能在胰腺癌的治疗中发挥重要作用。 近年来,虽然有成百上千的分子靶向药物在临床前研究中获得了可喜的成果,但一经进入临床试验,大多数以失败而告终。究其原因,很大一部分是由于用于临床前研究的模型不能代表临床病人情况。研究发现,PDTT(patient drived tumor tissue)动物模型与相应的临床病人状况相似度极高,可以模拟原肿瘤的生物学行为与发展过程,也能保持与对应病人一致的药物敏感性。被认为是用于肿瘤新药临床前筛选合适的平台。 目的:本课题旨在建立可供临床前研究的胰腺癌PDTT裸鼠皮下移植瘤模型,通过其在临床前水平评价埃克替尼治疗胰腺癌的有效性,并初步探索其内在的作用机制。 方法:胰腺癌PDTT移植瘤的建立:从临床确诊胰腺癌的病人手术中获取组织标本(GO),将其接种于BALB-C裸鼠胁部皮下,将成瘤模型肿瘤传代至3代以上(G1-G3)准备药物敏感性实验。同时将GO与G3在组织形态与分子特征方面进行比较,鉴定,以确定其与原发肿瘤的一致性。并从其中一模型瘤体中分出胰腺癌细胞用于后续药物敏感性实验。 体外药物效研究:从PD∏模型分离出一胰腺癌细胞系,并结合已有细胞用MTT法检测埃克替尼单药或联合吉西他滨对KRAS野生和突变型胰腺癌细胞系的增殖能力的影响。同时以非小胞肺癌作为细胞对照,厄洛替尼作为试剂对照。 体内药效研究:采用胰腺癌PDTT裸鼠皮下移植瘤模型研究埃克替尼的体内治疗胰腺癌的作用。通过定期测量各组瘤体体积,确定埃克替尼对移植瘤有无抑制作用;监测各组裸鼠体重,了解埃克替尼在体内的毒副作用;治疗结束后,留取各组瘤体冰冻与石蜡组织为行病理学与分子学分析作准备。 药物机制研究:应用蛋白印迹(Western Blot)检测埃克替尼对EGFR活性及其下游MAPK信号的影响;检测吉西他滨与埃克替尼单药或联合应用时EGFR与HER2表达与磷酸化情况变化情况;在移植瘤中应用免疫组织化学方法进一步验证蛋白印迹结果。 结果:成功建立了4例胰腺导管腺癌PDTT裸鼠移植瘤模型,其组织形态、蛋白表达、基因突变状态都与来源肿瘤高度一致。埃克替尼在体外体内都能抑制胰腺癌的生长;能抑制EGF及下游ERK的磷酸化;其联合吉西他滨可增强后者的抗瘤效果;吉西他滨单药可以诱导胰腺癌MAPK信号的活化,但这种效应在加入埃克替尼后得到有效抑制。 结论:1、成功建立了4例胰腺PDTT移植瘤模型,其在组织特征、分子表达及基因突变等方面都与来源肿瘤有着良好的一致性。 2、无论在细胞系还是PDTT模型中,埃克替尼都能抑制胰腺癌的生长,其作用与KRAS突变状态无关。埃克替尼联合吉西他滨增强后者抗瘤效果,其机制可能与抑制吉西他滨诱导的MAPK信号通路有关。


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1 何奎锋;应用PDTT裸鼠移植瘤模型评价埃可替尼对胰腺癌治疗效用的临床前研究[D];浙江大学;2014年
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