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毛花猕猴桃根活性部位与活性成分制备及其抗肿瘤活性研究

卢泳庄  
【摘要】:毛花猕猴桃(Actinidia eriantha Benth.)又称白山毛桃、毛冬瓜,为猕猴桃科猕猴桃属植物。而白山毛桃根是畲族民间治疗肿瘤的习用药材,广泛用于胃癌、乳腺癌、食道癌、鼻咽癌和肝癌等的治疗,但相关的药效物质基础及其作用机制尚不清楚,本研究旨在发现毛花猕猴桃根具有抗肿瘤作用的活性部位及成分,并初步探讨它们的抗肿瘤机制。论文首先采用快速层析法将毛花猕猴桃根的乙醇总提物(AE-E)粗分,得到二氯甲烷洗脱物(AE-E/DM)及甲醇洗脱物(AE-E/M)两个部位;综合采用硅胶色谱柱层析法及葡聚糖凝胶纯化法,分离得到单体化合物(AE-P);采用质谱及核磁共振技术鉴定AE-P的结构为2α,3α,24-三羟基-12-烯-28-乌苏酸。论文还采用HPLC-PAD法测定了不同批次毛花猕猴桃根药材及不同提取部位中2α,3α,24-三羟基-12-烯-28-乌苏酸的含量。论文采用MTT法对毛花猕猴桃根的不同提取、分离部位及化合物2α,3α,24-三羟基-12-烯-28-乌苏酸进行了活性筛选,结果表明AE-E/DM对人肝癌细胞株HepG2,人前列腺癌细胞株pc3,人胃癌细胞株BGC-823,人结直肠腺癌sw620的增殖均有显著地抑制作用,推测其可能为毛花猕猴桃根发挥抗肿瘤作用的潜在活性部位;2α,3α,24-三羟基-12-烯-28-乌苏酸亦能显著地抑制以上四种癌细胞增殖。论文采用人结直肠腺癌sw620裸鼠移植瘤模型对2α,3α,24-三羟基-12-烯-28-乌苏酸的体内抗肿瘤活性进行了验证,证实其能剂量依赖性的抑制人结直肠腺肿瘤的生长,推测其可能为毛花猕猴桃根发挥抗肿瘤作用的潜在活性成分之一。论文中进一步采用AO/EB染色、流式细胞术以及western blot技术初步探讨了2α,3α,24-三羟基-12-烯-28-乌苏酸抗结直肠腺癌的作用机制。结果表明其能引起细胞凋亡,并伴随自噬。本研究为揭示毛花猕猴桃根的药效物质基础奠定了一定的基础,为其进一步在抗肿瘤领域的应用提供了初步的科学数据。


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