L-精氨酸对大鼠皮瓣缺血再灌注损伤的保护作用

【摘要】： 在过去30年中，由于显微外科迅速发展，吻合小血管的游离皮瓣移植已 成为整形外科进行组织移植、再植、重建和器宫再造的一项新的重要的技术。 即使游离皮瓣移植围手术期的每一步都能很好完成，仍有10％移植皮瓣因缺 血再灌注（ischemia-reperfusion IR）损伤而出现坏死。皮瓣IR损伤的病 理生理学机制主要包括组织局部中性粒细胞浸润增多、氧自由基损伤、细胞 内钙离子超载、高能磷酸化合物缺乏和无复流。文献报道了一些药物或方法 可改善皮瓣IR损伤，有效地提高皮瓣成活面积。这些药物或方法主要有抗粘 附分子单克隆抗体、自由基清除剂、免疫抑制剂、高能化合物、高压氧、缺 血预处理等。一氧化氮（nitric oxide NO）是具有广泛生物学活性的自由基。 它在心血管系统能维持血管平滑肌的紧张度、抑制血小板聚集、粘附和调节 血管平滑肌细胞增生；在神经系统它参与信息传递、神经和血管间的协调和 内脏功能的调节。NO作为病理生理性信使介导炎症过程和免疫反应。NO在 IR损伤的作用已引起广泛研究，结论颇不一致。大多数人认为NO对IR损伤 有保护作用“－”，osei等用镰状细胞性贫血的转基因鼠及正常鼠观察其在缺 血缺氧时的变化，前者结构型一氧化氮合酶（。。nstitutive NOS cNOS）表达 缺失，在缺血区及其周围，诱生型一氧化氮合酶（inducible NOS iNOS）表 达是升高的，正常鼠iNOS表达不升高且分布无序；组织学检查显示转基因鼠 缺血区组织结构的损伤较正常对照鼠明显减轻，提示iNOS对缺血缺氧性损伤 有保护作用。但也有人认为 NO可加重 IR损伤”－“’。Turnage等应用大鼠小 肠IR模型，于再灌注前应用训 特异性抑制剂可有效改善IR诱导的肺微循 环障碍，而应用广谱NOS抑制剂则对IR诱导的肺微循环障碍无改善作用。以 上实验结果表明，不同实验模型，不同NOS抑制剂可产生不同的实验效果。 实验目的 研究 NO前体卜精氨酸（LArsinine L－Ars）对大鼠皮瓣m损伤有保护作 用还是加重IR损伤。 材料和方法 1．大鼠皮瓣缺血再灌注模型和实验分组 25只雌性SD大鼠，体重180－300克，于大鼠右侧腹部游离一轴型皮瓣， 长宽比为 6cm X 3cm（附图 1、2）。大鼠随机分成 3组，①空白对照组，SD 大鼠5只，皮瓣无缺血再灌注过程。②对照组，SD大鼠10只，于上腹部浅 血管发出点近端之股动脉放置无创伤动脉夹，在手术显微镜下确认股动脉和 蒂动脉血流被完全阻断。10小时后除去动脉夹，放掉动脉夹前半小时经腹腔 注射生理盐水M。＠L－Arg组，SD大鼠 10只，缺血再灌注过程与对照组 相同，放掉动脉夹前半小时经腹腔注射5％L－Arg溶液（300mg／kg）。 2 2．组织学检查 空白对照组于术后 22小时、对照组和 L－Afg组于再灌注后 12小时（即 术后22小时），于皮瓣中心处取一全层组织块，放入40％福尔马林溶液中固 定，石蜡包埋切片后行 HE染色。在 400倍光镜下行中性粒细胞（polymor－ phofltiCICSFflClltfophilpMN）计数，因肉膜下层pMN浸润最明显，于肉膜下 层选10个不交叉高倍野进行计数，并观察微血管和组织病变情况。 3．红外线热像图测定皮温 室内温度经空调机控制在22OC左右。空白对照组于术后34小时、对照 组和 L－Arg组于再灌注后 24小时（即术后 34小时）进行红外线热像图检查， 用钢丝标志皮瓣范围，将红外线热像图检测仪探头对准皮瓣，调整大鼠与探 头距离，测定皮瓣平均温度，并以相同方法测定对侧腹部相应部位正常皮肤 平均温度。计算对侧腹部相应部位正常皮肤与皮瓣之间的温差。 4．皮瓣坏死比率测定 术后第 7天，经颈静脉注射 10％荧光素钠溶液（15mg／k），20分钟后，在 紫外线下检查皮瓣坏死情况。用带小网格的透明纸计算皮瓣坏死和成活部分 的网格数，并依此计算皮瓣坏死面积占皮瓣总面积的百分比。 结 果 1．皮瓣坏死比率 空白对照组皮瓣全部成活（附图引，对照组皮瓣坏死面积占整个皮瓣面 积的比率平均为 sl．83士10．78％（附图 4），乙－Arg组为 6．68士4．44％（附图 5）。 卜Afg组中有2例皮瓣无坏死。皮瓣坏死主要位于皮瓣远端部分，坏死先从 3 最远端开始，逐渐向近侧扩展，于术后第5天稳定下来。皮瓣坏死比率空白 对照组与对照组相比有显著性差异（P＜0．of），L叭fg组与对照组相比也有显 著性差异（P＜0．of）。 2．组织学检查 2．IPMN浸润数 PMN浸润以皮瓣肉膜下层最显著，真皮层和皮下层有散在PMN浸润。 空白对照组 PMN浸润数为 67．70士23．05／10HP（附图 6），对照组为 216．90士 55。32门oHP（附图7），L－Afg组为57．Zo士16．05门OHP（附图8）。空白对照组 与对照组相比有显著性差异（P＜0．01），＊－＊侣组与对照组相比也有显著性差 异（P＜0刀1），但空白对照组与卜＊侣组相比无显著性差异（P＞0刀5