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NGF、KGF在银屑病中的表达和意义

颜文飞  
【摘要】: 银屑病是一种常见的慢性炎症性皮肤病。其重要的病理特征是 角质形成细胞的过度增生和炎症细胞的局部浸润。尽管目前从组织 病理、生化代谢、遗传及细胞动力学等多个方面观察到本病存在着 某些异常变化,但对本病复杂的病理过程的产生还缺乏全面的解 释。近年来,大量实验资料显示来源于角质形成细胞(Keratinocyte, KC)的神经细胞生长因子(Nerve Growth Factor,NGF)和来源于成 纤维细胞的角质形成细胞生长因子(Keratinocyte Growth Factor, KGF)作为KC有效的促细胞有丝分裂因子,对KC的增殖、分化、 移行及炎症细胞的浸润均起着重要的作用。迄今尚未见关于NGF、 KGF表达与临床因素关系的研究及它们在不同部位表达的比较及 NGF、KGF表达的平行性研究。本研究拟观察NGF、KGF及其受 体、EGFR、PCNA在KC中的表达情况,并比较不同年龄、性别、 病程、病期、不同部位各因子之间可能存在的相互关系并探讨其机 制。 实验方法 标本取材 研究对象包括33例银屑病患者,寻常型,其中男22例, 女*例;年龄6-62岁,平均48岁;病程2周-41年,平均9年。 正常对照组为非皮肤病的外科门诊小手术切取的正常皮肤13例。 活检标本采用常规小手术切取皮损区皮肤,及距皮损 Icm处外观 正常皮肤8块,取材后标本分成两块,一块立即置液氮保存并置于 .80℃深低温冰箱;另一块经10%福尔马林包埋,送往病理科蜡块 保存。将冰冻切片切成 5 fill切片;丙酮固定:将含有组织的蜡块 切成约sum左右的切片,经脱蜡、水化后运用免疫组化SP法染色。 多克隆抗体:角质形成细胞生长因子(KGF)2 角质形成细胞生长 因于受体(**FN;神经细胞生长因子州*n。以上均为Santa Cruze 公司产品。单克隆抗体:神经细胞生长因于受体(**FR);表皮 细胞生长因子受体(EGFR);增殖细胞核抗原(PCNA)。以上均购 自福建迈新生物技术开发公司。 兔疫组化SP法染色 冰冻切片经冷丙酮固定10 分钟,PBS 液洗3次。滴加 3%HZO。缓冲液,孵育 10分钟,然后 PBS液清洗 三次。每张切片上加 50ill的链亲和素-过氧化物酶溶液,室温下孵 育 30分钟后 PBS液冲洗5分钟X3。每张切片上加 50ill的第一抗 体,分别为鼠抗人单克隆NGF、兔抗人多克隆KGF、兔抗人多克 隆 KGFR,4’C温度下孵育过夜后 PBS液冲洗 5分钟 X 3。每张切 片上加50UI的生物素标记的第二抗体,30分钟后叩S液冲洗5分 钟 X 3。每张切片上加 50ill 的链亲和素-过氧化物酶溶液,显微镜 下观察着色情况,约5分钟后用自来水冲洗。在每张切片上加100UI 新鲜配置的DAB溶液,显微镜下观察着色情况,约5分钟后用自 来水冲洗。用苏木素复染约4分钟后自来水冲洗干狰,自然干燥后, 2 再用中性树胶封固。石蜡切片则常规脱蜡和水化后,用PBS液冲 洗3次,每次 5分钟,每张切片上加 3%HZOZ,以阻断内源性过氧 化物酶的活性,室温下孵育 10分钟,PB S液冲洗后将切片置人抗 原修复工作液中,电炉上加热,使温度保持在98”C-100oC,自然 冷却20分钟后,PBS液冲洗3次,然后各加一滴非兔疫性动物血 清,PBS液冲洗后,再滴加 1抗,分别为鼠抗人单克隆 PCNA和 EGFR,余步骤同前。以PBS液代替1抗作为阴性对照组。 统计方法:统计处理采用SPSSS.0统计软件包中的H检验(Kruskal and Wallis 法)以及 Kendall 等级相关分析。 结 果 正常表皮中,KGF、KGF受体主要微弱地表达在基底层细胞的 胞浆;NGF在正常表皮未见或仅见微弱的表达,NGF受体则主要 表达在角质层、颗粒层;EGFR表达以表皮上层为主,而PCNA在 基底细胞有零星的分布。 银屑病表皮中,KGF、KGF受体在表皮的基底层及基底上层有 较强的表达,相对正常表皮明显上调;NGF 主要表达在角化不全 的角质层。颗粒层、棘细胞层上部,表达以胞核为主,而在基底细 胞的底膜也有微弱的表达;NGF 受体主要表达在角质层、棘细胞 层上部,余未见表达;EGFR则主要表达在棘细胞上部的表皮各层, 而基底细胞及棘细胞下层未见表达,真皮及皮下组织内可见少量 淋巴细胞。血管内皮细胞表达:***A则不仅表达在基底细胞,而 且在棘细胞下层可见较多的表达。 银屑病患者皮损中各因于的表达与临床因素关系分析:KGF。 NGF、EGFR、PCNA 的表达与患者的性别、年龄的大小、病程的 3 长短均无关(P>0.05)。而 KGF。NGF、EGFR的表达在进行期、 缓解期的表达均具有统计学上的显著差异,P分别为0.012、0、020、 0.052。 与正常对照组、非皮损组相比,皮损组KGF、KGF受体表达 均明显上调沙均<O.05);而正常对照组与非皮损组则无显著性差异 (P>0.05);**F、**FR在银屑病皮损的表达与正常对照组、非 皮损组相比有显著性差异(P<0.05)Z正常对照组与非皮损组亦有 显著性差异(P<0刀1)。银屑病皮损区**FR比正常皮肤、非皮损 区的表达显著上调o<0


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