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器官移植受者巨细胞病毒分离株糖蛋白基因分型

钱景  
【摘要】: HCMV感染在免疫功能低下人群尤其是幼儿、AIDS病人以及器 官移植受者中可引起严重疾病,甚至导致患者死亡。针对免疫功能低 下人群HCMV疫苗接种是保护这一人群的有效途径。HCMVgB、gH糖蛋 白具有强抗原性,其序列中存在一些主要中和抗体和T细胞作用位点, 故而是HCMV亚单位疫苗的优选表位。HCMVgB基因N末端(gBn)、gp116 和gp55间的蛋白质裂解区(gBclv)以及HCMVgH基因N末端存在核苷 酸序列差异,分析这些位点可将HCMV临床分离株分为4个gB基因型 和2个gH基因型。在器官移植受者中,关于HCMVgB基因型的分布及 生物学意义的研究日益增多,提示HCMVgB基因型与病毒毒力相关,可 作为判断临床预后的指标之一;HCMVgB基因型分布存在一定的地域、 种族差异,可能有新的基因型被发现。关于器官移植受者gH基因分型 也有研究,但其生物学意义尚未阐明。在我国关于器官移植受者 HCMVgB、gH基因型的研究尚未见报道。 本研究旨在了解浙江省器官移植受者HCMV分离株糖蛋白gB、gH 基因型分布情况,为进一步研究HCMV的致病性、免疫性以及选择HCMV 亚单位疫苗的理想表位提供依据。 本研究收集了自1999年12月至2000年9月浙江大学医学院附属 第一医院肾移植、肝移植、骨髓移植受者术后1~40周外周血标本97 例252份。其中骨髓移植18例98份系列血标本;肝移植20例93份 系列血标本;肾移植57人份;心脏移植2例4份。所有标本经EDTA 抗凝,并于采血后S小时内分离出淋巴细胞,提取基因组DNA。根据 HCMVgB、gH基因序列设计六对引物,采用巢式 PCR(nestPCR,nPCR) 分别扩增HCMVgBfl(54~485hp)、HCMVgBCIV(1284~1600hp)、gH(-58~ 230hP)核昔酸片段,扩增产物分别为431hP、316hP、288hP,扩增片 段包含 HCMVgBn、nBc IV、oH基因 核苦酸变异集中位点。选择阳性产 物,经纯化后直接测序,通过序列分析将其分型。分析浙江省HCMV 分离株基因型分布情况。标准株参考AD 169及Towne实验株。统计学 分析采用SPSS干C软件进行X‘检验。 结果显示: 1.在 252份标本中,有 23例移植受者(10例 BMT,5例 LT,8例 RT) 的标本经 uPeR检山 HCMVsBn、srsc IV、sHm性。通过核昔酸及相应 氨基酸分析进行分型。16例得到nBn基因分型结果,其中nBnl型 3例(18.80),2地 1例(6.3%),3型 11例(68.8%),l、3混合 刑1例(6.3%),十见4型,gBrl基冈型分布以gBn3型为主(X’二12.286, P二0.006);14例得到gBCIV基因分型结果,分属于gBCIVI~3型, 其中gBc VI刑8例(57.l%),2型3例(21.4%),3v3例(21.4%), 术见 4 型,gBclv基因型早散在分布(x‘二3.571,P=0.168);20 例得到 gH地基冈结果,分属了 gHI~2型,其中洲 则 10例(50%), gHZ型6例(朋%),gHI、2混合型4例(m%),gH基因型呈散在分 布(x’。400,p二0.135)。 2·[[」V邓n、卯oh、咄基冈型在各移植类型间的分布米见差异。 3.在 11例 HCMV临床分离株中,有 5例(45 5%)相应 vBn、nBclv基 冈地别不一致。表现为gBc Ivl-gBn3型4例,gBclvlgBnl、3型1 例。vBnZ~3型与gBc IvZ~3 F:l则呈现出对应关系。 4·HCMVgB、gH基因型之间没有对应关系。 本研究结果得到如卜结论: 1.浙江省器官移植受者 HCMV临床分离株,其糖蛋白基因分别属于 gB 基因型l~3型,nH基因型1~2型。nBn基因型分布以nBn3型为主。 2 gBC与 gH基因型呈散在分布。gB基因型分布与欧美等地有差异, 与日本、香港类似。HCMVgB基因型分布受到地域、种族限制。 2.浙江省器官移植受者HCMVgB、gH基因型分布与移植种类无关。 3.浙江省器官移植受者 HCMV临床分离株存在较多的 gBclv与 gBn基因 型别的不对应现象,提示该地区 HCMV临床株有较高频率株内基因重 组发生,是否由此导致病毒抗原性发生改变,逃避机体免疫监视, 值得进一步研究。


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