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人参总皂甙对D-半乳糖衰老模型大鼠海马生长抑素阳性神经元表达的影响

郑荣昌  
【摘要】: 有关衰老的研究在基础和临床医学中都是一个被重视的课题。随着 社会人口老龄化,有关衰老尤其是脑衰老的研究,已经成为研究的热点。 在探讨脑的衰老变化机理研究中,脑内生长抑素(Somatostatin,SS) 的变化是人们颇为关注的神经肽之一。SS为环状14肽,与学习记忆密切 相关,目前研究已确认,海马结构内的SS神经元与垂体前叶生长激素的 分泌和释放活动没有直接关系,而与学习、记忆密切相关,具有抗遗忘 作用,是记忆的物质基础,已有研究资料表明,老龄大鼠海马SS水平低 下,SS阳性神经元密度降低。 人参总皂甙是传统中药人参的主要有效成分之一,具有人参的主要 生理活性,近年来有关人参总皂甙抗衰老研究十分热门,已有研究资料 表明,人参总皂甙可以有效延缓神经系统机能的老龄性退变。然而,有 —— 关人参总皂贰对衰老大鼠海马内SS神经元作用的研究,国内外未见报道。 本课题采用卜半乳糖亚急性中毒衰老模型大鼠,应用免疫组化ABCfk检测 大鼠海马SS阳性神经元分布,观察人参总皂贰对衰老大鼠海马生长抑素 变化的影响,探讨人参总皂贰的抗衰老作用。 一、材料和方法 (一)动物分组 18只Wistar大鼠(雄性,体重265士369,四月龄),随机分为对照 组、造模组和给药组三组,每组6只。 (二)衰老模型的建立及给药 造模组:皮下注射卜半乳糖(48mg/kg”d)6周。 给药组:皮下注射卜半乳糖N8峪八g”d)同时给予人参总皂贰灌胃 (50mg/kg”d)6周。 对照组:皮下注射生理盐水u 八g’d)6周。 (三)取材、固定、切片 各组大鼠经戊巴比妥钠(46mg/kg)腹腔注射麻醉,开胸,经左心 室4%多聚甲醛缓冲液灌注取脑,入4%多聚甲醛缓冲液后固定6-8小时, 常规脱水、浸蜡、包埋,Leitz切片机鼠脑冠状位连续切片,片厚5 u m。 (四)免疫组他BC法检挪S 采用华美公司提供的全组分ABC免疫组化检测试剂盒,一抗为兔抗SS 血清(二军大神经生物学教研室),* 1500稀释,结合时间:湿盒中 4 oC过夜。其余操作按试剂盒说明书进行。 DAB染色、复染封片,01y晌us光镜下观察。 一2一 —— ABC法染色的同时,分别做阳性对照和阴性对照。 (五)图像分析 每个标本选择2张相同断面的切片,在olympus BHZ显微镜10X 10下, 用JVC Digital Ca。era分别对各组切片的m、CA3、CA4&DG区进行采样 (采样过程中保持光源亮度恒定,以保证各组切片光密度的可比性), 采样结果输入计算机,应用HPIAS-1000(高清晰度病理图文分析系统, High resolution Pathological Image Analysis Syste。,同济医科大 学)进行图像分析,测定SS阳性神经元的积分光密度。在olympus显微镜 下用测微尺计数SS阳性神经元(个/m。z)。 (六)数据处理及统计分析 数据以平均数士标准差表示,用SPSS 8.0统计软件进行 单因素方差分析(one-。ay ANOVA)。 二、结果和讨论 (一)各组大鼠海马SS免疫阳性神经元定量分析结果比较 表1 三组大鼠海马SS阳性神经元计数(个/mmz) 组别n CAI CA3 CA4&DG 对照组6 89.17士16.55All6.33士11.83A 183.67士23.18A 造模纽 6 35.00士4.94““58.17is.13““68.33士8.89”“ 给药组 6 79.32土8.94八 107.17土13.”凸 180.弧士ZI.22凸 注:幼示与对照组比较,P<0.of ;八示与造模组比较,P<0.of -3- —— 表二 三组大鼠海马SS免疫阳性神经元积分光密度 组别n CAI CA3 CA4&DG 对照组6 12.70士l.33 12.62土l.69 13.48士l.58 造模组6 6.99土0.61““6.93土0.34““7.20土0.44““ 给药组6 12.25士1.43八 12.47土1.46么 12.59士1.36A 注:林示与对照组比较,P刃.01;A示与造模组比较,P吻.01 实验结果显示,给药组与造模组比较,海马各区SS阳性神经元数目 和积分光密度均有显著增加(P<0.01)。给药组与对照组相比,海马各 区SS阳性神经元数目和积分光密度无统计学差异(P>0.15)。提示人参 总皂贰对卜半乳糖加速衰老模型大鼠海马SS能神经元有较好的保护作 用。 二四-半乳糖致大鼠亚急性衰老模型在抗衰老研究中的应用 D-半乳糖致大鼠亚急性衰老模型是以衰老自由基代谢紊乱学说为理 论基础建立的一种简便实用可靠的衰老动物模型,在国内外抗衰老研究 中得到广泛应用。本实验结果表明衰老模型大鼠海马内SS阳性神经元数 目及积分光密度均比正常对照组显著减少(p<0.of),与己有报道一致, 从一定程度上证实了D-半乳糖致大鼠衰老模型是一种简便、优良的衰老 模型。 (三)海马SS$龄变化与认知障碍的关系 海马结构内的SS阳性神经元与学习、记忆密切相关。SS有利于记忆 的强化,具有抗遗忘作用,是记忆的物质基础。已有研究资料表明,衰 老大鼠海马SS水平低下,SS阳性神经?


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