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胸腺肽α1对淋巴细胞信号转导分子表达影响的研究

朱海红  
【摘要】: 胸腺是人体中枢免疫器官之一,是T细胞分化、发育、成熟的主要场所。因 此,在淋巴系统发育和维持免疫系统的正常功能中起重要作用。近年来有学者认 为,胸腺除了在免疫作用方面的中心地位外,还可能对机体神经-内分泌系统有影 响。人体进入青春期以后,胸腺开始生理性萎缩,肿瘤、感染、免疫性疾病等发 病率逐渐增高。大量研究表明小牛胸腺的提取物可辅助治疗肿瘤、感染及其他由 于胸腺功能低下而引起的疾病。 胸腺组织的网状上皮细胞可产生多种胸腺激素,如胸腺肽、胸腺生成素、胸 腺体液因子、淋巴细胞刺激因子、血清胸腺因子等。这些可溶性物质是构成胸腺 微环境的主要因素,在T细胞分化和发育成熟过程中起重要的调节作用。近年国 外学者将胸腺激素分为几种单独成分。由28个氨基酸组成的胸腺肽α1(thymosin alpha 1,Tα1)是胸腺激素的组成成分之一,属于胸腺肽第五组分,最初由 Goldstein等分离。胸腺肽α1具有免疫调节作用,在体外可以促进致敏淋巴细胞 分泌细胞因子,如IFN-α,IFN-γ,IL-2;促进高亲和力细胞因子受体的表达; 调控骨髓前体细胞和脾细胞的末端脱氧核糖核酸转移酶活性;增强骨髓前体细胞 的Thy1和Lyt1,2,3的表达;加速NK细胞的生成,增强NK细胞的活性;通过增 强辅助T细胞的活性可以促进同种和/或自身淋巴细胞的反应;拮抗胸腺细胞成熟 过程中的凋亡。体内应用结果也表明其在T细胞发育和功能重建中具有重要作用; 可促进淋巴细胞分泌IL-2和表达IL-2受体;增强宿主的抗感染能力;促进机体清 除病毒;增强免疫功能;有抗氧化;抑制癌细胞生长等重要作用。因此,胸腺肽 α1具有增强宿主免疫功能、促进病毒消除和抑制癌细胞生长等重要作用。 临床上常应用于慢性乙型肝炎、丙型肝炎等病毒感染、肿瘤(如黑色素瘤、 肺癌、白血病、鳞状上皮细胞癌和结肠癌等)、以及免疫缺陷病人的辅助治疗,效 果较为显著。并可作为疫苗增强剂使用。因此,对其作用机制的研究将与其在传 染病学、肿瘤学和免疫学领域中的应用密切相关。 目前,国内外对胸腺肽α1的研究多数集中在生物学功能和应用方面,并取 得很大进展。但是对胸腺肽of的作川机制尤其是胸腺肽al作用于淋巴细胞后信 号传导方面的报道却甚少。 首先,至今尚未克隆到胸腺肽al受体,因此对胸腺肽al受体知之甚少。目 前仅有研究表明胸腺肽al可以和细胞表面的一些结构结合。如:Garaci等人用 兔疫荧光法观察到小鼠淋巴细胞表面存在高亲和力的受体;MOOdy等人发现胸腺 肽o可与 VIP(vasoactive intestinal pCptide)受体结合,但亲和力较低(IC50=10 u M),但胸腺肽 al又不是 VIP受体的拈抗剂,所以推测其是否存在另外的信号 接受分子。尽管如此,至少说明存在一种分子可以与胸腺肽al 结合的分子,即 胸腺肽。l结合蛋白(thymosin alphalbindng protein,TBP)。所以阐明胸腺肽 al 结合蛋白,也就意味着可阐明其发挥生物活性作用的第一级信号接受分子,将对 研究胸腺肽al受体,进而研究胸腺肽al的作用机制和进一步探索其功能产生重 要影响。 其次,缺乏对胸腺肽al 引起的信号转导分子改变的相关报道。虽然,对胸 腺肽al作用的第二信使研究有了一定的进展,但人类迄今尚未明确何种物质首 先接受胸腺肽al的信息,并且有哪些分于参与传递胸腺肽al的信息,以及引起 哪些信号分子的改变。 为研究胸腺肽al作用的分子机制,也为胸腺肽al的临床应用提供科学的实 验依据,本研究利用酵母双杂交系统研究了胸腺肽al 结合蛋白,并利用基因芯 片技术探讨Ta信号转导过程中信号分于的变化;对阐明Ta在免疫系统中的 重耍作用及其潜在的抗衰老作用具有重要意义。同时对深入认识并合理干预Ta 的信号转导过程,从而达到治疗各种相关疾病的目的具有重要的理论价值。并且, 为发现新的抗病毒、抗肿瘤和免疫调节的“靶点”奠定基础。 论文一酵母双杂交系统筛选胸腺肽al结合蛋白的初步研究 一、重组体 PGBKT7-T川的构建 为获取人Tal基因,根据文献报道用化学方法合成人Tal基因及其相应的引 物,上游带有EcoR及起始密码子(ATG),下游带有BamH酶切位点和终止密 码于(TAG)。经聚合酶链反应(PCR)技术扩增得到双链 Tal基因。以 EcoR、BamH I双酶切 pGBKT7载体(Clontech)和 Tal基因,酶切产物用 T4连接酶作粘端 连接,得到pGBKT7-Tal重组体。以PCR和酶切方法筛选鉴定重组体,最后经 测序证实Tol全序列已完整无误地插入p GBKT7载体。将其中的一个阳性重组 体命名为PGT25。 二、鉴定诱饵蛋白无启动wS下游启动子转录报道基因的活性 2 为鉴定重组体PGBKT7-Toil(PGT25)本身是否会启动UAS下游的启动子表达 下游基因的活性,小规模乙酸现酵母转化法将pGT25导入酵母AH109。转化菌铺 于SD/TrP/X-a-gal的板上,7大后长出的均为白色克隆,证明重组体本身无启动 UAS下游的启动于表达厂游基因的活性。大量扩?


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