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幽门螺杆菌感染患者血清特异性尿素酶B亚单位测定的研究

陈国弟  
【摘要】: 自从1982年Warren和Marshall从慢性活动性胃炎患者的胃粘膜中分离出 幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)以来,H.pylori受到了极大的关注。现在 认为H.pylori是慢性胃炎的主要致病因素,与消化性溃疡、胃癌及胃粘膜相关性 淋巴样组织淋巴瘤的发生发展关系密切,WHO和国际抗癌联盟已将H.pylori列 为Ⅰ类致癌物。H.pyori还可以通过慢性持续性的感染,引起免疫反应,与胃肠 外多种疾病有关,如冠心病、急性心肌梗塞、儿童生长迟缓及格林巴利综合征等。 H.pylori的人群感染率高,推测全球近一半人感染过该菌。H.pylori在人 体感染时间长达数十年,甚至有些人终生携带该菌。疫苗接种将是预防H.pylori 感染最有效的方法。兔疫研究初期使用的是H.pylori的超声粉碎抗原,粗制抗 原含抗原成分较多,存在交叉免疫反应,副反应较大。最近报道了脂多糖、粘附 素、热休克蛋白、全菌抗原、尿素酶、空泡毒素(VacA)和毒素相关蛋白(CagA) 及过氧化氢酶等疫苗抗原可诱导保护性抗体的产生,但各种抗原组分都有优缺 点。目前研究最多的是尿素酶抗原,尤其是尿素酶B亚单位(Ure B)的特异性 更受重视。迄今国内外虽已有多篇研究报道,但目前尿素酶疫苗的研究仍存在一 些问题,如H.pylori菌株的多样性增加了开发抗H.pylori疫苗的难度。我们根 据ure B的保守序列,人工合成了Ure B核心多肽,以克服H.pylori菌株尿素 2001浙江大学硕士学位论文 酶的变异性。尿素酶ureA、ureB是结构基因,但为了避兔H.pylon尿素酶变异 株的影响,本课题应用国际标准株、临床分离株及尿素酶突变株混合菌液制备尿 素酶(全长)蛋白,用以制备多克隆lgG抗体,建立血清游离H.Pylon UreB及 UreBtsG、UreB-IgA、UreBtsM三型兔疫复合物的酶免疫测定法。以验证 H.pylon阳性患者血清中是否存在 Ure B,讨论 Ure B能否引起特异性的免疫应 答以及免疫应答的形式,探讨 Ure B核心多肽作为疫苗抗原的可能。 142例临床收集的患者,经1999年H.PylOOi阳性科研诊断标准(H.PylOOi IgG、RUT或UBT、MB染色,三项中任二项阳性)诊断,其中61例H.pylon 阳性。61例阳性患者血清检测结果进行统计学分析。本研究血清游离 UreB阳性 率63.9%,UreB-IgG阳性率62.3O,UreB-IgA阳性率75.4O,UreB-IgM阳性率 78.7%,四项联检任一项阳性有60例,阳性率为98。4%。联检阳性率显著高于单 项的阳性率。而在 39例游离 UreB阳性的血清中,UreBtsG阳性率刀石%, UreB伦A阳性率74.4%,UreBteM阳性率76.9%,三项免疫复合物联检任一项 阳性有37例,阳性率94.9%。联检阳性率显著高于单项的阳性率。进一步分析 发现血清与 UreB-IgG型复合物之间的相关性有统计学意义,而游离 Ure B与 UreBtsA型、UreB-IgM型复合物以及三型免疫复合物之间的相关性均无统计学 意义。61例血清四种形式 UreB的检测结果见表 1。 表 161例 H.pylon阳性患者血清游离 UreB及 UreB-IgG、UreB-IgA、 UreB伦咖三型免疫复合物检测结果 方法 阳性 阴性 游离 UreB 39 22 UreB-IgG*38 23 UreB-IgA 46 UreB-IgM 48 13 一 2一 2001浙江大学硕士学位论文 基于以上工作,可得到如下结论: 1.建立了血清 H.pylon UreB及其兔疫复合物的酶免疫测定法。 2.H.pylon感染患者血清中存在游离UreB,UreB能引起特异性兔疫应答, 并能形成特异性免疫复合物。不同患者所引发的免疫应答类型不同,形 式有 IgG型、IgA型及 IgM型等; 3.血清游离UreB与UreB-IgG型免疫复合物相关,而游离UreB与 UreBtsA、UreB-IgM型兔疫复合物以及三型免疫复合物之间均无相关 性; 4·H.pylofi UffB核心多肽具有特异性的抗原表位,从而为 UreB核心多肽 作为H.pylon疫苗抗原提供了理论依据。


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