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人类肿瘤基因治疗载体的高效制备和体外治疗效果评价

陈灏  
【摘要】: 本文较系统地研究了用于肿瘤基因治疗的质粒载体的高效制备工艺。首先采用Plackett-Burman实验设计方法确定了MBL培养基对质粒生产和细胞生长影响最大的几个组分,然后对这些组分分别进行单因素优化,考察了它们对质粒产量、菌体量及质粒产率的影响,确定了高效生产质粒的较合适的培养基组成。结果表明葡萄糖是最适碳源,其最适浓度为5g/L,甘油适于作为辅助碳源,最适氮源浓度为酵母提取物15g/l、酪蛋白水解物20g/l。发现在培养基中较低水平(<2.Og/l)的乙酸积累对质粒生产有一定促进作用。同时,考察了温度、抗生素添加等培养条件和压力对质粒生产的影响,确定了最适培养温度为36℃。在21发酵罐上分别进行了间歇发酵和流加发酵实验,完成了初步发酵放大,质粒产量达到75mg/l(流加发酵)。利用初步提纯的质粒对大肠癌细胞进行了体外转染,发现具有一定的凋亡作用。构建成功了鸡贫血病毒凋亡蛋白的克隆载体,并对表达载体的构建进行了有益的尝试。


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