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杭白菊对常见心脏疾病模型的干预性实验研究

徐万红  
【摘要】: 背景: 心律失常是多种心脏病严重的症状表现及致死的主要原因之一,其中心室纤颤是引起心源性瘁死的最常见病理生理机制。目前临床仍缺少疗效高、毒性低并可长期使用的抗心律失常药。心肌缺血/再灌注或心肌缺氧/再给氧损伤是目前十分活跃的研究领域之一,冠脉搭桥手术、溶栓术、变异型心绞痛、冠脉痉挛再通时导致病情加剧及瘁死等均与此密切相关。其发病学与近年研究证实的“氧反常”(oxygen paradox)、“钙反常”(calcium paradox)相似,即缺血心肌损伤主要不是发生在缺血期间,而是在血供恢复即分子氧重新进入原先缺血缺氧组织时,生成了大量超氧化物和细胞毒类物质,引起再灌注损伤。 杭白菊(Dendranthema morifolium(Ramat)Tzvel,DM)是浙江驰名中外的地道药材,为浙八味之一,有清热、平肝、明目功能。根据报道,菊花对冠心病、高血压有治疗作用,其水煎醇沉剂对离体和在位心脏有明显的扩张冠脉及增加冠脉流量、提高心肌耗氧量的作用,并减慢心率,影响心肌收缩力。对电刺激兔中枢神经引起的缺血性心电 浙江大学硕士学位论文 图ST段压低有减轻作用,并能使兔心的室颤消除而恢复正常搏动。但杭白菊对心肌收 缩力的影响各家报道并不一致,其对实验性心律失常的作用以及影响缺血再灌注和缺氧 /复氧引起的心肌功能改变的相关机制研究甚少。 目的: l、应用乌头碱和氯仿造成的心律大常模型初步探讨杭白菊对实验性心律失常的影响。 2、应用Langendoer离体心脏灌流模型和离体单个心室肌细胞模型研究杭白菊对离体大 鼠心脏缺血再灌注和心肌细胞缺氧/复氧引起心功能改变的影响及其机制。 方法: l、乌头碱诱发的大鼠心律大常模型建立 将大鼠巾1.2 g/kg乌拉坦麻醉。仰卧{tlul定,暴露股静脉,置留滞针。采用标准肢 体导联记录心电图,注入乌头碱 30 Ug/kg,5秒内注完,观察室性早搏(VPB),室性心 动过速(VT),室颤(VF)出现时间,持续时间(发生次数)和结束时间。 二、氯仿诱发的小鼠心律大常模型建立 将小鼠分别放入 500 ml玻璃罩内,罩内预先放置浸有2 ml氯仿的棉球,当小鼠呼 吸停止5秒后,取出并接H导联心屯图,观察室颤发生率,转津率,每换一小鼠加氯仿 0.5 mla 3、心律失常评分法 SCOfC<IOgl0VPBS)+2(IOglollUffibCF OfCplSOdCS OfVT)+2[(lOg10flUffibCF OfCplSOdCS Of 2 浙江大学硕士学位论文 VFy(log;。total duration ofVF)],用于对心律大常严重程度进行定量分析。 4、离体心脏Langendoof灌流及左室功能评价 迅速取出心脏,转移、同定于 L&llgendorff灌流装置,以改良 KfCbS-HenseIClt 液(K爿液)行常规恒压灌流(76 mmHg),通过 MedLab生物信号采集处理系统记 录。C’电图和左室收缩曲线,并计算左室发展压(LVDP)、心率(HR)、最大收缩/ 舒张速率(土印/山—*x):同时记录冠脉流量(*F)。 5、心室肌细胞酶解分离 迅速取出心脏,固定于Langendorff灌流装置,进行恒流灌流。先以无钙TyFode 氏液灌流 5 min,再以含 I型胶原酶 0.3 mg/ffil的无钙 TyTode氏液灌流 10 min。然后将 心室取下、剪碎、吹打,于含 0.l%BSA的无钙 Tyrode氏液中孵育 10 min。逐步复钙至 Ca’”终浓度为 1二5 mmol/L。 6、单个心室肌细胞收缩的测定 将 50-100 ilL细胞悬液滴于玻璃底灌流槽中,用改良 K-H液以 2 ml/min持续 灌流,施加频率为0.4 Hi、强度为两倍阈强度的电场刺激。用 MedEase视频跟踪计 算机图像分忻系统记录并分析心室肌细胞的收缩。 7、细胞内游离钙的测定 用细胞内双波长钙荧光系统(T.1.L.L,德国)检测细胞内游离钙离于浓度,以 Fura-2/AM为钙指示剂。在灌流槽中通过片状铂屯极施加频率为 0.2 Hi,强度为 50 V的 电场刺激诱导细胞兴奋。光信号通过 T.I.L.L放大器经 Digidata 200输入计算机,由 pClamp 7刀软件记录分析。使用 340 urn/380 urn的比值来反映细胞内钙离子浓度。 3 浙江大学硕士学位论文 8、离体。乙脏缺血-再灌注模型和离体心肌细胞缺氧/复氧模型 离体灌流心脏的缺血模型参照Shekher报道的方法,用丝线结扎冠脉的左前 降支(LAD)30 min,再灌注 30 min,记录心功能指标的变化,以心电图 ST段 持续抬高作为结扎成功的标志。离体心肌细胞的缺氧/复氧模型采用化学


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