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哮喘大鼠肺组织环核苷酸磷酸二酯酶活性的改变及其机制研究

宋燕华  
【摘要】: 前言:哮喘是一类以支气管及肺部气道阻塞、气道高反应性及气道炎症为特征的复杂的炎症性疾病,IL-4等细胞因子有促使IgE生成、促进肥大细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞的生长、分化和趋化等作用,而在哮喘的始发和维持中起重要作用。有研究表明卡介苗(BCG)给药的致敏小鼠可以刺激巨噬细胞、单核细胞释放IFN-γ等细胞因子的产生,抑制IL-4等细胞因子的产生,进而减弱炎症的发展。环核苷酸磷酸二酯酶(PDE)是一类催化水解第二信使,使其转变为生物学活性丧失的单磷酸的关键酶,通过调节细胞内环核苷酸水平,影响细胞的生理功能。有文献报道变应性疾病如变应性皮炎病人外周血淋巴细胞的PDE活性升高,同时证实哮喘病人外周血单核细胞cAMP-PDE活性较正常人明显升高。关于环核苷酸磷酸二酯酶活性升高的机制目前尚无明确结论,但一些体外实验表明IL-4使人外周血单核细胞PDE活性升高。 目的:采用主动致敏后重复抗原攻击的大鼠为哮喘模型,观察致敏后重复抗原攻击的大鼠的肺功能、肺组织中PDE活性和肺组织中IL-4含量的变化情况, 浙江大学硕士学位论文 哮喘大鼠肺组织环核昔酸瞩酸二函酶活性的改变及其机制研究 以及经典平喘药氨茶碱、地塞米松对其影响,同时观察卡介苗给药后致敏并重 复抗原攻击的大鼠肺功能、肺组织中PDE活性和肺组织中IL4含量的变化情 况,在整体实验中就IL.4水平初步探讨肺组织中PDE活性变化的机制。 方洁:检测对照、致敏和致敏后重复抗原攻击的大鼠肺功能、肺组织中PDE活 性和lIn4含量,以及氨茶碱、地塞米松给药以及BCG给药对致敏并重复抗原 攻击的大鼠肺功能、肺组织中PDE活性和IL-4含量的影响情况。①大鼠用卵 白蛋白(OA)和佐剂主动致敏,OA雾化吸入重复攻击。②肺功能测定采用密 闭体积描记箱法,肺顺应性以平均潮气量与平均跨肺压之比值计算,肺阻力以 平均跨肺压与呼吸气流速度之比值计算。③以肺组织匀浆作为酶样品,酶反应 进行于含 Md\ CJ的 PBS液,包含 cAMP、cGMP各 l。mow。反应后离 心后取上清液 50 PI在 HPCL进样,以 eLC外标法测定样品中底物 cAMP、 CGMP的含量。肺组织PDE活性以底物水解量表示:(对照管底物含量一测定 管底物含量)/(肺组织匀浆酶蛋白量X酶反应时间)。④肺组织匀浆上清液IL-4 含量用大鼠IL-4酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒进行测定,按试剂盒中附有的 说明书操作。⑤蛋白定量采用考马斯亮蓝测定法。③统计学处理采用 SPSS 10.0 统计软件包。 结果: ①与对照组大鼠相比,OA攻击组大鼠肺顺应性明显下降(n=8,P<0刀5),肺 阻力明显增加(n=8,P<0.05人氨茶碱Q mghg)组较 OA攻击组大鼠的肺顺 应性明显升高(一8,P< 0.05),肺阻力明显降低(_8,P< 0.05人而氨茶碱(IO m吵g)组较 OA攻击组大鼠的肺阻力显著降低(n=8,P<0.05人肺顺应性升高 但不显著(n=8,PX)刀5人地塞米松m.lmghg)组较OA攻击组大鼠的肺阻 力有明显降低(n=8,P<0刀5),肺顺应性升高但不显著(PX)刀5);地塞米松(0.5 m叭g)组使大鼠肺顺应性明显升高,肺阻力显著降低(n=7,P<0.05人与对照 组相比,卡介苗对照组大鼠的肺顺应性和肺阻力均无明显区别(n=7,P>队05)。 2 浙江大学硕士学位论文 哮喘大阻肺组织环核耷函酥酸二函醇活性的改变及其机制研究 卡介茵+OA攻击组与OA攻击组相比肺顺应性显著升高,肺阻力显著降低(n=7, P<).05L与对照组相比无明显区别(n71,P>0.05人肺功能恢复对照组水平。 上述结果表明,氨茶碱、地塞米松和卡介苗给药均对致敏后重复抗原攻击的哮 喘大鼠的肺功能有改善作用。 ②致敏组大鼠肺组织CGMPPDE活性与对照组相比无明显差异。OA攻击组 大鼠肺组织cGMP-PDE活性较对照组显著升高(n=8,P<0.05),与致敏组相比 无明显差异;致敏组大鼠肺组织。AMP-PDE活性与对照组相比无明显差异。 OA攻击组大鼠肺组织。AMP-PDE活性较对照组及致敏组均显著升高(n=8, P<0.05人氨茶碱 2 m叭g、地塞米松 0.lmghg、地塞米松 0.5 mghg均使致敏 后重复抗原攻击大鼠肺组织cGMP-PDE和cAMPPDE活性明显下降(各n=8, P<005)。卡介苗对照组大鼠肺组织 cGMPPDE、cAMP-PDE活性与对照组均 无明


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