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产ESBLs肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌流行病学及分子生物学研究

李家斌  
【摘要】: 研究背景 超广谱β-内酰胺类抗生素,如头孢噻肟、头孢曲松、氨曲南和头孢他啶引入临床应用后不久,欧洲即首先在肠杆菌科细菌中发现了超广谱β-内酰胺酶(Extended-spectrum β-lactamases,ESBLs),随后有关ESBLs的报告遍及世界各地。ESBLs是由革兰阴性菌,如肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、奇异变形杆菌、粘质沙雷氏菌、阴沟肠杆菌、不动杆菌和铜绿假单胞菌等产生的,且能使氧亚氨基(anoxyimino group)β-内酰胺抗生素,如第三代头孢菌素和单环酰胺类氨曲南失活。由于其水解底物较广谱β-内酰胺酶(TEM-1、TEM-2和SHV-1)更加广泛,故称之为ESBLs。产ESBLs的肠杆菌科的耐药问题是当前全球最重要的医院内感染耐药问题之一,且检测又是实验室的难点,另外,由于各地区流行的基因型不同而存在耐药性和检测底物的地区差别,因此,了解产ESBLs的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的最佳检测底物及耐药性特点,有利于防止产ESBLs株的区域性流行,并指导临床治疗,以免延误病情和造成浪费。 鉴于国内尚无大范围的调查研究资料,1999年9月至2000年9月间,我们对安徽省合肥市四家大医院临床标本中分离出的299株肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的ESBLs产生情况、产ESBLs菌株的耐药性及其检测进行了研究,并对经ESBLs表型确认试验证实产ESBLs的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌,进行了耐药基因的初步分型。 博士论文第一部分:摘要 目的 了解安徽省合肥市产ESBLs的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌检测的最佳底物。 调查1999年9月至2000年9月安徽省合肥市产ESBLS的肺炎克雷伯菌和大肠 埃希菌的流行状况及耐药性。 了解 1999上000年合肥市多家医院临床分离的产 ESBLs的肺炎克雷伯菌和大肠 埃希菌中p.内酚胺酶基因型的初步分布倩况。 材料与方法 收集四家大医院临床标本分离的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌共299株,采用美 国DADE公司的Microscan Walkawcy-40全自动微生物分析仪,对菌株进行重新鉴 定(具体操作详见其说明书),经ESBLS初步筛选试验和表型确认试验筛选出产 ESBLS细菌。并用该系统的微量肉汤稀释法检测其对20种抗生素耐药性,用标准 纸片扩散法(KrbyBauer test脸测其对头抱皈酮/舒巴坦的耐药性。 根据GenBank的基本序列设计TEM、SHV、CTX-M和OXA四对引物,分别 用这些引物对表型确认试验证实产ESBLs的细菌进行PCR扩增。 结果 合肥市检测田*k的最佳底物是头抱噬肘,其次为头抱曲松:头抱他陡不宜作 为该地区ESBLs的检测底物。 合肥市肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中ESBLs检出率分别为50.5%和24二%,总 检出率为328%。产ESBLs菌对头抱他陡、氨曲南、头抱西丁、头袍毗厉、头抱吸 酮/舒巴坦、吸拉西林/他哇巴坦、阿米卡星及环丙沙星等20种抗生素的耐药率比不 -2- 博士论文第一部分:摘要 产酶株都有不同程度增加,但亚胺配能对所有产ESBLs菌株都敏感。 98株产ESBLS细菌中,79株产TEM型p-内酚胺酶,27株产SHV型p-内酚 胺酶,16株产 CTX-M型 p-内酞胺酶,2株产 OXA型 p-内酞胺酶,11株产非 TEMSHVCTXMOXA型p.内酚胺酶。 结论 本研究揭示了安徽省合肥市检测ESBLs的最佳底物是头抱噬胎,其次为头抱曲 松和氨曲南,而本地区单用头抱他咤作为筛选底物时,漏检率较高,故本地区用于 ESBLs筛选的底物以头抱噎厉联合头抱曲松或氨曲南为宜。 本研究发现,合肥市肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中ESBLs的产生率高,流行广, 应引起足够重视,严加控制。 临床资料及药敏资料证明产ESBLs肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌是重要的医院 内感染细菌,且呈多重耐药,治疗中碳青霉烯类药物是最可靠的;含p.内酞胺酶抑 制剂的复合制剂及头霉素类药物耐药程度也较高,应适当增加剂量,并可与阿米卡 星联合应用;第四代头抱菌素(头抱毗肪)、环丙沙星和氨基糖昔类药物不适宜于 产ESBLs细菌感染的治疗。 合肥市表型为产ESBLs的菌株中,主要基因型为IFM型p.内酞胺酶,其次为 SHV型和CTXM型,但具体分子流行病学状况,有待进一步研究。


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