抗氧化剂茶多酚对环孢素A诱导慢性肾毒性作用时转化生长因子-β1表达和细胞凋亡的影响

【摘要】： 环孢素A(cyclosporineA，CsA)是同种器官移植和自身免疫性疾病患者的基础免疫抑制剂，使肾、心、肝、肺和胰腺等移植的移植物短期(如1年)存活率得到明显提高，如移植肾一年的存活率从CsA应用前的50％-60％，提高到现在的90％左右，如移植肝一年的存活率从CsA应用前的300％-50％，提高到目前的80％左右，但是肾与非肾移植的病人和移植物长期存活率并没有取得类似的改善，如现今肝移植5年的存活率为60％左右。现认为钙调神经磷酸酶抑制剂如CsA、FK506的肾毒性作用，已成为影响器官移植患者与移植物长期存活的重要因素之一。CsA肾毒性作用可分为两类：急性肾毒性和慢性肾毒性。急性肾毒性，属功能性改变，与CsA临床剂量相关，CsA撤除后可能逆转的肾功能受损，主要是由缩血管介质引起的肾血液动力学和肾小球滤过率的改变，如内皮素-1、血栓素A、血管紧张素Ⅱ、血小板活化因子等缩血管介质，及一氧化氮(nitric oxide，NO)与前列腺素生成不足及活性氧(reactive oxygen species，ROS)等因素参与CsA急性肾毒性过程。慢性肾毒性，属结构性改变，常为进行性的、难以逆转的肾功能受损，特征是肾小管细胞空泡变性、小管萎缩与条纹状间质纤维化、肾小球输入动脉玻璃样变性与肾小球硬化。CsA慢性肾毒性病因尚不完全清楚，与下列因素密切相关： (1)CsA引起致纤维增生作用因子如转化生长因子-β1(TGF-β1)和炎性细胞趋化因子如骨桥蛋白、单核细胞趋化因子等表达增加；(2)CsA引起抑制细胞外基质降解蛋白酶如Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制物(PAI-1)和金属蛋白酶组织抑制因子表达增加；(3)CsA引起缩血管介质如内皮素-1、血栓素A， （TXA人 白三烯（LT）等释放增加，内皮素l、T乙勺、LT均可促进TGF－ 61的表达，抑制细胞外基质的降解；（4）CsA可使活性氧（ROS）产生增加， 促发脂质过氧化反应，促进n人和LT的合成，TXA与LT受体桔抗剂能显 著缓解CsA的急、馒性肾毒性作用；u）CsA能激活凋亡相关基因（如FasL、 Bax、P53卜增加肾小管与间质细胞的凋亡，与小管萎缩和间质纤维化有关。 总之，兀卜p互、炎性细胞趋化因子、血管活性介质、＊鹏和细胞凋亡等因素 参与CSA诱导的慢性肾毒性作用。 目前CSA与FK506是临床常规应用的免疫抑制剂，在作用机理上均属于 钙调神经磷酸酶的抑制剂，其抑制T细胞激活的机理和临床毒付作用均相似， 它们的谩性肾毒性作用，现已成为同种移植患者与移植物长期存活的主要制 约因素之一。 目的 本实验用 CsA i性肾毒性动物模型，观察抗氧化剂茶多酚（tea polyphpnals，TP）能否减少CSA慢性肾毒性过程中肾细胞的TGF－of表达和细 胞凋亡，是否减轻CsA慢性肾毒性作用。茶多酚是绿茶中提取的多酚类化合 物，国内、外研究表明其具有较低氧化还原电位，因此具有强的抗氧化能力， 而且茶多酚获得自由基上的电子后，转变成结构较稳定的醒式结构，从而达 到清除自由基的作用。 材料与方祛 用32只雄性SD大鼠，体重200上30克，随机分4组，处 理前一周开始低盐饮食，饲料中氯化钠含量为0．049％，各组均处理4周：（） 环抱素 A溶剂（vehicle）组：n二8，vehicle（oliv oil） 1．smlkg‘·d一‘皮下注射（ set ）： 。（2）茶多酚（TP）组：n＝8，TP80呷k＊－“d－‘灌胃（讲；（3）环抱素A（CsA） 组：n＝8，CsA sing ks－＊ d‘set；（4）环抱素 A加茶多酚（CsA＋T）组：n＝8， CsA 15lug kg－“d－‘set＋P 80 hg kg－＊d‘ig。处理 4周后用代谢宠收集大鼠 24 ’J’时尿液。后氯胺酮麻醉大鼠，取血2 ml分离血清，测血和尿Cr含量、并 计算肌田清除率ocf）。用04 oC 20ml含肝素生理盐水O00U）灌洗双肾， 取肾组织作病理学检查（HE与Masson染色），用免疫组织化学、RT－PCR和 2 western blot检测TGF－pl表达，TUNEL法从组织形态学上检测肾细胞的凋亡、 RT－PCR法检测凋亡密切相关酶caspase卡InRNA表达并检测其酶活性， 阴spase上是半眺氨酸蛋白酶家族的一员，是细胞凋亡过程中的重要效应分 子。 实验结果以均数士标准差表示，用8＾SS刀统计软件作方差分析及组间q 检验；病理检查评分采用Knlskal－WainS方法，两组间比较用灿勾七法。设 P＜0刀5有统计学意义。 l 技果 各处理组28天后进行肾功能和组织病理分析，与CSA组相比，CSA 与茶多酚联用能明显改善肾功能和减轻肾小管细胞损伤与间质纤维化程度 （P＜0刀5）。与CSA组相比，CSA与茶多酚联用显著减少肾皮质和髓质的 TGF卡 InRNA的表达0＜0．05人免疫组织化学法和western