干扰素-γ抗肝纤维化动物实验和临床研究

【摘要】： 第—部分 动物实验研究 本研究的设计参照WHO(1975年)和我国国家药品监督管理局(SDA)新药临床前研究指导原则的要求，采用两种不同的的肝纤维化动物模型，用三种不同剂量的IFN-γ进行治疗，观察不同剂量IFN-γ对不同原因引起的肝纤维化动物的治疗作用和量效关系。同时观察停止治疗后动物肝纤维化的逆转情况。 材料与方法 CCl_4大鼠肝纤维化模型 SD大鼠205只，体重200～250g。将CCl_4与橄揽油以4：6配成40％油剂，按0．3ml／100g体重皮下注射，2次/周，每周末处死5只大鼠观察肝脏病理改变，观察中度肝纤维化形成。以后继续使用CCl_4与橄揽油油剂直到实验结束。实验第4周末，大鼠肝纤维化模型建成，将余下的150只SD大鼠，按照随机表编号分成IFN-γ大、中、小剂量治疗组、秋水仙碱治疗组、CCl_4：模型对照组5组，每组30只，另设正 常对照组 10只。前 3组分别按 15万 IUlkg、5万 IUlkg、1．67万 IUlkg体重肌肉注 射IFN7，每天1次，连用巴周；秋水仙碱用生理盐水溶解，按0lwi体重灌胃， 每天l次，连用8周；模型对照组、正常对照组以生理盐水代替，同样方法处理。 抬疗期间继续使用CCh维持大鼠肝纤维化程度直到实验结束。治疗8周后各组随机 取10只大鼠解剖取肝脏和血清进行检测，观察疗效。余下大鼠停止治疗，继续观 察4周至实验结束，处死所有大鼠，解剖取肝脏和血清进行检测。 DMN大鼠肝纤维化模型组 SD大鼠 278只，体重 200－2509。按 10mglkg体重腹腔内注射 1％DMN，共 13 次，实验第1周连续用药3d，每天1次：后5周每周连续用药Zd，共6周，每周 末杀S只大鼠观察病理改变，直到中度肝纤维化形成。实验第4周末，大鼠肝纤维 化模型建成，将余下的196只SD大鼠，随机分成5组。其中，IFNq大、中、小 剂量治疗组各40只，秋水仙碱治疗组30只，DMN模型对照对照组46只，另设正 常对照组 10只。前 3组按 15万 IUlkg、5万 IUlkg、1．67万 IU Ikg体重内肌肉注射 IPNq，每天 1次，连用 4周；秋水仙碱用生理盐水溶解，按 0刁 i体重灌胃， 每天1次，连用4周；染毒对照组、正常对照组以生理盐水代替。治疗4周后各组 随机取10只大鼠解剖取肝脏和血清检测，观察疗效。 检测指标 （一）病理组织学检查：分别进行HE、天狼猩红染色和Masson染色，按1995 年全国肝炎防治会议制订的标推和肝纤维化组织学半定量计分系统（SSS）标准观 －察肝纤维化变化情况。偏光显微镜下观察胶原分布情况，计算机图像分析系统于偏 光显微镜下测胶原面积。同时，还采用王宝恩等报道的肝纤维化病理分级判定标准 观察纤维化分级。 （H）ex．SMA免疫组化染色 （三）肝 Hyp含量测定 （四）血清HA及常规肝功能试验测定 统计方法 2 用SPSS 7．0对定量资料进行方差分析，病理学半定量资料用比m出刊－Wllis检 验。 结 果 一、各组大鼠的死亡情况显示IFN7治疗后的各组大鼠死亡数较少 二、治疗结束时组织学检查结果显示IFN1治疗后大鼠肝纤维化程度较模型组 和秋水仙碱治疗组明显下降，三组间的疗效随剂量增加而显著 根据95标准和SSS标准计分，Kusal－Wallis检验分析，4组治疗组肝纤维化 程度比较模型组均有显著差异（Pe．05），但疗效以IFN－Y大剂量治疗组最优，IFNry 中、小剂量治疗组次之，秋水仙碱再次之，三者间均有显著差异（Ped．05），IFNy中、 小剂量治疗组之间无明显差异（P＞0．05）。 三、CCI．摸型组停止IPNq治疗4周后，大鼠肝脏肝纤维化程度较治疗结束 时均有上升，上升程度与使用的剂量有关，接受治疗的剂量越大，肝纤维化上升程 度越小。 CCI．模型组实验第 16周（停止治疗 4周后），模型对照组所有大鼠纤维化分级 均超过4级，说明不进行治疗，模型对照组肝纤维化程度进一步加重。 治疗结束时，IFNq大剂量治疗组大鼠纤维化分级均未超过4级，停药4周后， 3只大鼠纤维化分级超过4级（20％）。 治疗结柬时，IFNq中剂量治疗组有 1只大鼠纤维化分级超过 4级 （l％）， 停药4周后，6只大鼠纤维化分级超过4级（42．9％）。 治疗结束时，IFNq小剂量抬疗组有3只大鼠纤维化分级超过4级（3