铁皮石斛多倍体诱导及鉴定

【摘要】： 本文以铁皮石斛种胚为材料，用秋水仙素诱导多倍体，就秋水仙素浓度、处理时间、种胚发育阶段等进行了较为系统的研究，并与二倍体进行了比较，初步建立了一套适合于铁皮石斛多倍体鉴定的方法。结果表明： 1、在N_6基本培养基上，添加NAA比2,4-D更有利于铁皮石斛种胚萌发，当浓度为0.5mg／L时，萌发率可达83.17％。 2、把原球茎或已萌发的种胚经一定浓度的秋水仙素溶液浸泡一定时间后再培养，或者把种胚接种在添加一定浓度的秋水仙素培养基中，均可诱发铁皮石斛多倍体的产生，但以前者效果为好，尤其是以萌发40d的种胚在0.3％秋水仙素中浸泡36h，诱变率最高，为63.51％。 3、铁皮石斛多倍体与二倍体在外形上有明显区别，多倍体植株茎矮、粗壮、叶片厚、叶色浓绿，且生长发育缓慢。 4、铁皮石斛根尖染色体压片的制作，采用0.002mol／L 8-羟基喹啉于18℃预处理5h，1mol／L盐酸于室温下解离2h，最后经改良苯酚品红染色。二倍体细胞的染色体数为2n＝2x=38，而四倍体细胞的染色体数则为2n=4x=76。 5、流式细胞仪测出诱变植株均存在两种细胞核，其DNA含量相差一倍，这说明这些诱变植株都是倍性嵌合体，与染色体压片的结果一致。利用流式细胞光度术测定细胞核DNA含量，试样制备简便，测量快速，精度高，是进行倍性鉴定的理想方法之一。 6、变异株与二倍体植株相比，气孔增大，单位面积气孔数目减少，而保卫细胞内的叶绿体数明显地增多，这一点可以作为染色体计数前多倍体初级筛选的标准。 7、多倍体与二倍体的酯酶同工酶未见差异，但过氧化物同工酶酶谱差异明显，多倍体中出现了Rf=0.600、Rf=0.667两条新的特异酶带。