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侵染稀硷和赛葵的双生病毒的分子鉴定

彭燕  
【摘要】: 从云南赛葵、稀硷、胜红蓟及苋属、银胶菊属和蒿属杂草上采集了23个病毒样本,用双生病毒单克隆抗体进行TAS-ELISA检测发现,赛葵样本VA2、VA7、VA8对SCR18单抗有弱阳性反应;稀硷样本X2对SCR18、106号单抗呈弱阳性反应;其他杂草材料均无明显阳性反应。 用双生病毒兼并引物PA、PB对杂草样本进行特异性的PCR检测,结果发现仅有赛葵样本VA2、VA7、VA8和稀硷样本X2出现约500bp条带,说明这些杂草上存在双生病毒。PCR产物测序后进行序列比较比较发现,3个赛葵样本之间的差异极小,核苷酸序列同源性大于95%,而与稀硷样本X2之间的同源性低于80%,因此推测赛葵样本可能是由同一病毒侵染,而稀硷样本为另一病毒侵染。 对稀硷样本X2的DNA-A进行了序列测定,X2 DNA-A全长2730个核苷酸(EMBL登录号AJ457823),DNA-A基因组结构具有典型的粉虱传双生病毒特性:共编码6个开放读码框架(ORF),其中病毒链编码AV1(CP)和AV2两个ORF,互补链编码AC1(Rep)、AC2、AC3和AC4四个ORF。而同源性和系统关系树分析得知,X2 DNA-A与中国番茄黄花曲叶病毒(TYLCCNV)烟草分离物Y38的同源性达99%,说明X2是中国番茄黄化曲叶病毒的一个分离物。 对赛葵样本VA2 DNA-A进行了序列测定,VA2 DNA-A全长2731个核苷酸(EMBL登录号AJ457824)。VA2 DNA-A基因组结构具有典型的粉虱传双生病毒特性:共编码6个可读框(ORFs),其中病毒链编码AV1(CP)和AV2两个ORF,互补链编码AC1(Rep)、AC2、AC3和AC4四个ORF。VA2 DNA-A与与秋葵黄脉花叶病毒分离物201(OYVMV-[201]AJ002451)的同源性最高,为77%,其余均小于76%。根据“双生病毒科病毒全基因组核苷酸序列同源性小于89%,往往定名为不同病毒;大于89%,则认为是同一病毒的不同株系”这一原则,VA2为双生病毒的一种新种,根据病毒分类委员会命名原则,我们将该病毒命名为赛葵黄脉病毒,英文名为Malvastrum yellow vein virus,简称MYVV。


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