侵染胜红蓟和假马鞭的双生病毒的分子鉴定

【摘要】： 本研究对侵染胜红蓟(Ageratum conyzoides)和假马鞭(Stachytarpheta jamaicensis)的双生病毒进行了分子鉴定，并获得如下结果： 利用三抗体夹心ELISA(TAS-ELISA)及PCR检测的方法对采自海南的胜红蓟(Ageratum conyzoides)和假马鞭(Stachytarpheta jamaicensis)的5个病样进行了检测，表明均为粉虱传双生病毒。PCR扩增产物克隆后进行序列测定，结果表明存在两类双生病毒，其中样品Hn2存在两类病毒的复合侵染。这是在海南首次报道存在有粉虱传双生病毒。在此基础上我们对胜红蓟和假马鞭上WTGs基因组进行了研究。 从胜红蓟样本Hn2中克隆并测定了两个DNA-A全序列(Hn2-1和Hn2-19)，经NCBI检索和序列比较分析发现，Hn2-1除与胜红蓟黄脉病毒(AYVV，基因登录号X74516)有85.6％的同源性外，其余均在85.0％以下。根据双生病毒全基因组核苷酸序列同源性小于89％为不同病毒的原则，我们将这些病毒分离物命名为中国胜红蓟黄脉病毒，英文名为Ageratum yellow vein China virus (AYVCNV)。Hn2-19和Hn2-1为Hn2样品中扩增到的不同分子，其基因组序列同源性高达97.7％，这表明Hn2中存在同种双生病毒的不同分离物的复合侵染。 从假马鞭样本Hn5和Hn6中克隆并测定了三个DNA-A全序列(Hn5-4、Hn5-1和Hn6-1)，经NCBI检索和序列比较分析发现，Hn5-1、Hn5-4和Hn6-1基因组均与亚洲报道的粉虱传双生病毒的基因组同源性最高，Hn5-4、Hn5-1和Hn6-1 3个序列间同源性＞95％，与印度尼西亚报道的番茄曲叶病毒(ToLCV，基因登录号AB100305)的同源性最高，为81.5％。根据双生病毒分类命名原则，Hn5-1、Hn5-4和Hn6-1为同种病毒的不同分离物，我们将这些病毒分离物命名为假马鞭曲叶病毒(Stachytarpheta leaf curl virus, StaLCV)。Hn5-1和Hn5-4为从Hn5样品中扩增到的2个不同的分了，说明Hn5中存在同种病毒不同分离物的复合侵染。