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荧光定量检测AFP mRNA的表达与原发性肝癌的相关性研究

吴存造  
【摘要】: 原发性肝癌是一种恶性度高、进展快、预后差的恶性肿瘤。目前能达到长期治愈的唯一希望仍是手术切除或肝移植,然而术后远期效果较差,复发转移率高,据文献报道复发转移率高达50%以上。这可能是因为术前外周血中已有肝癌细胞,或常规检查方法不能发现的微小转移灶,或是不完整的手术切除,或是术中、术后肿瘤细胞的播散。在分子水平上对肝癌的复发转移做出早期诊断,将可能在为患者选择的合适治疗方案,和监测其治疗效果提供很大的帮助,因此如何术前预测或术后预防肝癌的复发转移是当前的研究热点。 AFP基因位于第4对染色体,由14个外显子组成,长17kb(千碱基对)。在胚胎发育期,胎儿肝细胞和卵黄囊基因开放,表达AFP并分泌入血。出生后AFP表达迅速减少,而白蛋白合成增多。最近,在肝细胞肝癌的肿瘤组织AFP mRNA已经被发现而非肿瘤组织者没有,这被报道为当肝细胞癌变后,由于甲基化作用使AFP基因重新开放表达AFP。所以,至今血清AFP检测已广泛应用于肝癌的临床诊断,然而,血清AFP检测对预测肝癌是否转移意义不大,目前很多学者致力于检测外周血AFP mRNA来间接推测血循环中存在播散的肝肿瘤细胞的研究。 本研究采用核酸扩增技术结合荧光标记探针杂交方法(fluorescence quantitative(FQ)PCR combined with nest PCR)对肝癌特异性基因AFP mRNA进行定量检测。 吴存造 2003年浙江大学硕士学位论文 WuCunZao dssertation for M.M. 第一部分:检测原发性肝癌患者外周血单个核细胞 AFP mRNA表达的怠义 1.目 的 研究定量检测原发性肝癌患者外周血单个核细胞①BMC)甲胎蛋白AFP mRNA表达的意义。 2.材料与方法 2.l研究对象 收集2001~2002年我院收治的原发性肝癌等疾病95例。其中肝细胞肝癌 引例,男性 43例,女性 8例,年龄 27~70岁,中位年龄 41岁。经 B超、CT。 等影像学和血清AFP恨IA法)检查诊断,经手术切除病理证实39例;转移性肝癌 10例,其他肿瘤18例(胃癌6例、胰腺癌3例、直肠癌3例、乳腺癌3例、肺 癌3例人 慢性肝病患者16例(肝硬化12例,慢性肝炎4例)。 2.2方法 核酸扩增技术结合荧光标记探针杂交方法 3.3 统计学处理 采用/检验,所用数据均在 spss刀上处理,u二 0刀5。 3.结果 AFP mANA在非肝癌的恶性肿瘤患者无异常表达,在转移性肝癌(20%、 2/10)、慢性肝病(6.3% 1/16)、原发性肝癌(37.3%、19/sl);AFP mRNA的基 因拷贝数和肝癌TN M分期【‘]* 静脉癌栓、肝外转移显著相关,而与肿瘤大小及 血清AFP值无相关。 4.结论 巢式FQFCR检测肝癌患者外周血AFP-m叫A异常预示有血源性转移的可 能,可作为肝癌的诊断、肿瘤分期和有无肝外转移及愈后的指标。 第二部分:荧光定量检测肝癌、癌旁组织及外周血 AFP mRNA 1.目的:探讨肝癌、癌旁组织及外周血 AFP mANA的表达意义。 2.材料与方法: 2.1.二研究对象 收集 2001年门 月~2002年 2月年我院收治手术的原发性肝癌 30例,其中 男性26例,女性4例,年龄28~70岁,平均43岁。血清AFP(RIA法)Z20ng — —2一 吴存造 2003年浙江大学硕士学位论文 WuCunZao dissertation for M·M· /ml的 ZI例,AFP<20ng /ml的 8例。术前定量检测外周血 AFP mRNA,全部经 手术切除,病理诊断及免疫组化,术后并随访。 2.1.2材料 术前取静脉血sml送检(按说明书操作详见下);术中切除少量新鲜肝癌组 织、癌旁边约*,(各约0.sg人 迅速置液氮中冻存。 2.2方法核酸扩增技术结合荧光标记探针杂交方法 2.3 统计 采用几何均数配对t检验。 3.结果: 门)AFP mRNA在肝癌组织与癌旁组织的表达,两者表达量差异有显著性, P<0刀5。 (2)肝癌组织AFP mRNA的基因拷贝数与组织的分化程度、有无肝内浸润和 (或)转移及血清AFP明显相关;而与外周血的AFP mRNA的表达相关 无显著性。 4.结论: 定量检测 AFP mKNA表达情况可能判断肝癌组织的分化程度及早期诊断微 小肝癌、肝癌的复发和转移,并指导治疗,判断预后。


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