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脑室内注射胰岛素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤神经元凋亡的影响

叶莉芬  
【摘要】: 前言 新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic—ischemic encephalopathy,HIE)是由于围生期缺氧和脑血流减少或暂停而引起的新生儿中枢神经系统病变。它是导致儿童神经系统残疾的重要因素之一,目前发病机制尚未完全阐明,缺乏特异性治疗手段。凋亡作为神经元的主要死亡方式之一在HIE的迟发性损伤中占有重要地位,因此抗凋亡治疗可能成为临床治疗HIE的重要手段。胰岛素(insulin,IN)对成年大鼠局灶和全脑缺血性脑损伤均具有保护作用,最近又发现它能通过磷脂酰肌醇-3(PI-3)途径减轻培养神经元凋亡。我们给HIE新生大鼠脑室内注入胰岛素,观察其对神经元凋亡的影响并探讨其可能的抗凋亡机制。 方法 第一部分:胰岛素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤神经元凋亡影响的病理观察 参照Rice法建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型。14只HIE大鼠随机分为胰岛素干预组和对照组。模型制成后2小时干预组侧脑室注入小剂量胰岛素(1.0IU/kg),对照组脑室内注入等体积磷酸盐缓冲液(PBS)。缺氧缺血后24小 — —%————M—— 时,HE染色和透射电镜观察各大脑皮层和海马部位神经细胞凋亡情况。侧脑室 注射后卯分钟断尾取血 100 VI左右,用微量血糖测定仪测血糖。 第二部分:不同剂量胰岛素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤神经元凋亡的影响 参照Roe法建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型。32只HIE大鼠随机分为 小剂量胰岛素组、中剂量胰岛素组、大剂量胰岛素组和对照组。模型制成后2 小时仅脑室内分另注入刁剂量门刀IU/k)、中齐量(25fo71’g)、大齐量(5刀n川唱) 三种剂量的胰岛素和等体积PBS。缺氧缺血后24小时处死动物,取损伤侧脑组 织制成石蜡块,采用TUN’EL法检测凋亡,比较各组皮质和海马部位神经细胞凋 亡情况,深入探讨胰岛素在HIE中的抗凋亡作用。侧脑室注射后90分钟断尾取 血 100 pl左右,用微量血糖测定仪测血糖。 第三部分:不同剂量胰岛素对Hill大鼠脑组织Caspase—3的影响 参照uce法建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型。24只HIE大鼠随机分为 小剂量胰岛素组、中剂量胰岛素组、大剂量胰岛素组和对照组。模型制成后2 小时仅脑室内分另注入刁剂量门刀IU/k)、中齐量(2.seq)、大齐量(5刀n川唱) 三种剂量的胰岛素和等体积PBS。缺氧缺血后24小时处死动物,取损伤侧新鲜 脑组织,采用 Western一blot法检测各组脑组织 Caspase—3 P20亚单位表达情况, 研究胰岛素可能的抗凋亡机制。 结 果 1.脑室内注入PBS的新生大鼠脑组织切片HE染色光镜下在皮质、海马、纹状 体部位可见较多典型凋亡细胞和凋亡小体,而脑室内注入小剂量胰岛素的大鼠脑 组织凋亡细胞和凋亡小体稀疏分布。 2.TUN’EL染色并计数凋亡细胞结果:皮质部位:小剂量胰岛素组凋亡细胞(56, 25)显著少于对照组(12.50,74)(P==0刀of);中剂量胰岛素组凋亡细胞(39, 48)显著少于对照组u二0刀of);大剂量胰岛素组凋亡细胞(274,259)显著 多于对照组(P—0刀09);中剂量胰岛素组凋亡细胞显著少于小剂量胰岛素组u ==0007)。海马部位:小剂量胰岛素组凋亡细胞(l,13)显著少于对照组(30, 13)(尸=口刀02);中剂量胰岛素组凋亡细胞(13,吕)显著少于对照组(P==0.001); 3 — ———————————M 大剂量胰岛素组凋亡细胞k.50,15)显著多于对照组(尸一0刀of入 中剂量胰 岛素组凋亡细胞显著少于小剂量胰岛素组(尸=0刀08人 3.血糖检测结果:小剂量胰岛素组血糖水平(5.54士0.3 Inunol儿)与对照组(5.56 土0.27。of/L)无显著差别(P=0.934);中剂量胰岛素组血糖水平(4.80土 0.62nunol/L)显著低于对照组(P=0刀02);大剂量胰岛素组血糖水平(190土 0.听no几)显著低于对照组(P=0刀co)。 4.C8spssc一3检狈结果:各组 C8spssC 一3 p20亚单位*值比较:大齐量胰岛 素组o值(7.680,11.6100)与对照组(8.4750,7.7700)相比,无显著差别(P ==l刀);中剂量胰岛素 ID值门刀1,2.5775)显著低于对照组(P==0刀06);小 剂量胰岛素组o值(2275,3.2475)显著低于对照组(P==0刀16);中剂


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