颞下颌关节盘前移位后双板区组织内软骨细胞化生及超微结构研究

【摘要】： 关节盘前移位(ADD)是颞下颌关节紊乱病的一种常见类型。前移位的关节盘虽然可因关节内持续存在的微小创伤而对颞下颌关节(TMJ)组织造成病理性损害，但同时关节组织自身也在进行修复和改建过程，以适应新的盘突关系。但因人体关节盘标本取材十分困难，这种改建的机制尚不清楚。因此为研究ADD后TMJ的病理机制，需建立适宜的TMJADD动物模型。虽然已有很多学者通过不同的方法建立了TMJADD动物模型，但是均存在一定的缺点和不足之处，本实验对此进行改进。 采用10只健康成年日本大耳白兔，在8只动物的右侧颞下颌关节建立ADD动物模型。方法为：经全身麻醉及耳前区局部麻醉后，沿颧突根部上方斜向前下方颧弓表面做长约2.5-3cm的凹面向上的弧形切口，暴露眶下壁和眶后壁组织，在眶后壁处颧突根部的前下方，用带有弹力橡皮筋的针自下向上垂直穿过关节盘的前伸部，将双股弹力橡皮筋牵引关节盘向前，并用不锈钢丝固定于在颧弓的前中1／3交界近上缘处制备的小孔中，使弹力橡皮筋的形变长度从7mm至16mm，即约85g的力，而后冲洗、缝合。左侧作为实验对照侧，分别于术后1周、2周、4周和8周各处死2只。其余2只为空白对照，于术前处死。经固定及脱钙后，做成石蜡标本，切片后，行HE染色。 术后前三天，可见手术侧的下眼睑呈轻至中度的水肿及外翻，以后逐渐恢复正常。所有动物的体重均无明显减轻。各组动物的下颌均不同程度地偏向对照侧并伴 浙江大学硕士学位论文 有前牙的斜向磨耗，移位时间越长，下颌的偏斜及前牙的斜向磨耗越明显。 正常TMJ：关节结节的前缘与下颌骨躲状突的前缘在一直线上，关节盘的前 伸部位于关节结节与踝状突前缘的稍前方，关节结节顶正对关节盘中带的正中，关 节盘后带的后缘位于关节结节软骨面后缘的后方，关节结节、躲状突及关节盘的表 面光滑，关节结节及躲状突表面的关节软骨厚度较均一，关节盘内主要由软骨样细 胞所组成，双板区内主要由成纤维细胞所组成。术后所有动物均出现了关节盘的拉 长变形以及关节盘的前移位，而且各实验组之间盘前移的量亦基本一致，即：关节 盘前带位于关节结节与躲状突前缘的前方，关节盘中带从正对关节结节顶处前移至 平对关节结节前缘，关节盘后带的后缘由关节结节后方前移至与关节结节后缘相 对。 在ADD后的早期，躲状突和关节结节表面的关节软骨出现明显的破坏，关节 软骨的连续性丧失，呈现骨关节病样改变。而在术后4周和8周时，关节软骨的连 续性均已恢复。所有动物的关节盘表面均完整，未见关节盘及双板区表面的破碎、 断裂或穿孔，双板区下板的前份逐渐出现胞核椭圆形或圆形的软骨样细胞而呈现类 盘样变，在2周组一只动物的关节盘后带与双板区交界处还出现一明显的软骨化生 区，使双板区可以发挥关节盘本体部的功能。 在成功地对 TMJADD动物模型进行改进的基础上，又建立了 16 ／q兔 TMJADD动 物模型，分别于术后1周、2周、4周和8周各处死4只，制作成石蜡标本，用超 敏S－P免疫组织化学方法检测了正常及术后不同时期关节盘及双板区组织中FGFR3 及PCNA的表达情况。结果发现：正常兔TMJ关节盘软骨样细胞的胞浆及胞核中均 有FGFR3的表达，而PCNA阴性，双板区组织的成纤维细胞中FGFR3和PCNA均 不表达。术后1周时，双板区下板内可见部分细胞核成圆形或椭圆形的幼稚软骨细 胞，其内PCNA阳性，FGFR3呈弱阳性。术后2周时，双板区下板内的软骨样细胞 数较一周时略多，FGFR3的表达也略增强。在一只动物的双板区下板与关节盘本体 部交界处出现一幼稚的软骨化生区，此区内的细胞密集，FGFR3与PCNA均为阳性。 随着移位的时间延长，在双板区下板前部内软骨样细胞数逐渐增多，在分化较成熟 的软骨细胞中，FGFR3呈中等强度的表达，而PCNA阴性，在较幼稚的椭圆形软骨 样细胞中，FGFR3与PCNA均为阳性。可见，ADD后双板区内新形成的软骨样细 胞同关节盘本体部的软骨样细胞一样，具有表达FGFR3的能力，并且在双板区组 ．2－ 浙江大学硕士学位论文 织的适应性改建过程中，可能也有细胞的增殖及向软骨细胞的分化等过程的参与。 另外，我们还通过超敏S干兔疫组织化学方法检测了正常及术后不同时期关节 盘及双板区组织中S－100蛋白的表达情况。结果发现：正常兔TMJ关节盘软骨样细 胞的胞浆及胞核中均有中等强度的 S．100蛋白的表达，双板区内的成纤维细胞中则 无 S－100的表达。在术后 1周时，双板区下板前部组织内可见部分胞核椭圆形的纤 维软骨细胞，在这些细胞及周围的部分成纤维细胞中呈 S．100的弱表达。2周时双 板区下板内可见成熟的软骨细胞，S．100的表达也略增强。随着关节盘移位的时间 延长，双板区下板内成纤维细胞的数目逐渐减少，软