收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

胶原—壳聚糖人工皮肤替代物的初步研究

陆新  
【摘要】: 背景资料 皮肤的烧伤,创伤,慢性溃疡,肿瘤切除等多种因素都可以造成皮肤的全层损伤。如何修复创面,促进创面愈合,及改善愈后的功能和外观是外科领域的基本问题。皮肤组织工程的兴起为创面治疗揭开了崭新的一页。1975年Reinwald和Green在体外成功地培养了人皮肤角朊细胞膜片;1981年,O'Connour首次成功地将培养的自体表皮膜片(cultured epithelial autograft,CEA)应用于治疗烧伤创面。虽然CEA的使用拯救了许多生命,但它提供的只是表皮部分,移植存活率不稳定,愈后功能和外观得不到改善。真皮成份在促进创面愈合及改善愈后上起着重要的作用。经过多年的努力,在真皮替代物上的研究已取得了很大的成绩。目前,真皮替代物主要有三种类型:1.脱细胞异体真皮。2.合成的生物可降解材料。3.由交联的动物胶原基质构成。国外的人工皮肤产品,价格均十分昂贵,一块7.5cm直径的Apligraf为975$,50cm~2的Epicel 790$(即CEA),120cm~2Integra 1000$,而国内在研制胶原多孔膜加其它生物相容性材料再种植入真皮成纤维细胞构成活性人工真皮的研究还很少见,更没有形成商品。胶原和壳聚糖制取比较容易,所需成本不高,两者混合有一定机械强度,可用于构建人工皮肤。我们研究浙大自行研制的胶原壳聚糖多孔膜的细胞毒性并在多孔膜种植人皮肤成纤维细胞,初步形成了活性人工真皮替代物。完全意义上的组织工程化皮肤应当包括表皮和真皮,创面最终的愈合仍然要靠表皮覆盖。为此,我们进行了皮肤角朊细胞的培养,并在胶原壳聚糖平面膜上种植人皮肤角朊细胞构成了以可降解人工膜为载体的人表皮膜片作为表皮替代物,结合活性人工真皮替代 浙江大学硕士学位论文 物,有望应用于创面修复。这在自主开发人工皮肤的研究上有很大的意义。 目的 初步构建胶原-壳聚糖人工皮肤替代物,并从构建材料的细胞毒性和耐 酶消化能力,人工真皮替代物上成纤维细胞的增殖和活性情况及冻存的可能 性等多方面进行研究,为将其进一步应用于创面修复作准备。 材料和方法 胶原-壳聚糖多孔及平面膜由浙江大学高分子材料和工程学系提供。 一.皮肤细胞培养 1.人真皮成纤维细胞厂bS)的培养 取包皮环切术获得的皮肤以组织块培养法得到人真皮成纤维细胞并传 代培养,以5叫 代细胞为工作细胞。 2.胎儿皮肤角阮细胞的培养(KC) 取胎龄5个月后的引产胎儿背部皮肤,以酶消化法得到角肮细胞,培养 角肮细胞并传代培养。 二.胶原-壳聚糖多孔膜浸出液细胞毒性的研究 将胶原壳聚糖多孔膜浸提液用于培养FbS,空白对照为含10%小牛血清 的 DMEM培养液。培养 1、3、5天时以 MTT法测定光吸收值(OD),按下列公 式计算相对增殖率 (Ralativ growth rate,RGR)。RGR=(实验组光吸收值 /对照组光吸收值)X 100%然后按 ISO/TC194文件评定细胞毒性。 三.胶原-壳聚糖人工真皮替代物的构建 干热交联的胶原-壳聚糖多孔膜置 96 yL板,按 10~。m‘种植 Fbs,D地M 作培养基(高糖,含10%新生牛血清及双抗100u加厂置37t,5%CO。孵箱内 培养,每 2~3天换液一次。种植后 6天,17天作石腊切片,观察 FbS在膜 上形成的组织学结构。 四.吸光值(OD)与细胞数的关系 调整 Fbs密度至 ZX 10‘/ml,在 96孔板上按梯度稀释至 SX 10’/孔,2.5 X10’/了L,1.25X10’/了L,6.25X10‘子L,3.13X10‘/yL,1.56X10’/于L,7.8 2 浙江大学硕士学位论文 X 10’/孔,作 3 复孔。MTT法测定光吸收值(OD)。记录结果,并用 Excel 软件处理,得到细胞数与OD的回归方程。 五.人工真皮替代物上FbS增殖及活性情况 5.IFbS的增殖情况 将 Fbs种植在多孔膜,密度约在 3 X 10丫cm’,以 96孔培养板为对照。 每 3天换液。种植当天及 1、3、5、7、17天分别测定 OD值。利用四.所述 回归方程可得到细胞数,细胞数取对数值,将上述种植于多孔膜及培养孔中 的细胞增殖情况以半对数图表示进行比较。 5.ZL-2磷酸维生素C增加人工真皮替代物细胞活力情况 按 6.l方法种植 FbS并加人 L-2磷酸维生素 C,终浓度 50 P M。种植后 1、3、5、7、17天测定 OD值。与 FbS种植在多孔膜(不加 L-2磷酸维生素 C)比较。 5.3人工真皮替代物 Fb S分泌细胞因子情况 种植细胞3天时换液,再培养1 天,取上清,用抗体夹心ELISA法测 定人工真皮上清液几 -6,IL-8,以 DMEM+10%小牛血清作对照进行比较。 六.冻存人工真皮替代物的初步试验 FbS种植于 96孔板上的多孔膜后 5天,将其加入含 DMEM培养液 + 20% 新生牛血清+ 10%DMSOI.sml的冻存管中,置石棉泡沫盒后,移人一80C冰 箱中。分别于3大,14天时取出20管,37C水浴复温。于复苏后1、3、5、 12天,用 MTT法测定 OD值。 七.干热交联多孔膜与未交联的多孔膜体外降解情况


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前17条
1 苏丽萍,赵守亮,唐荣银,李玉成,余擎,周章华;生物因子盖髓载体壳聚糖多孔膜的制备和性能研究[J];牙体牙髓牙周病学杂志;2004年04期
2 马建标,王红军,何炳林,陈家童;壳聚糖与胶原或海藻酸复合物海绵的制备以及人胎儿皮肤成纤维细胞在其中的生长[J];自然科学进展;2000年10期
3 樊璐;杨慧;胡瑞珏;赵文芝;;层层自组装多孔膜及功能化涂层的构建[J];内蒙古石油化工;2021年04期
4 王宏伟;罗丽源;曹林博;韦淑娴;刘晓婷;马英一;;聚苯乙烯/螺吡喃多孔膜的制备及其性能研究[J];河南化工;2021年12期
5 王文恒;张辰;于跃;宫玉梅;;呼吸图案法制备聚苯乙烯-b-聚甲基丙烯酸甲酯有序多孔膜[J];大连工业大学学报;2019年04期
6 唐蕊华;刘丽娜;郑卓寅;姚雪;张素风;刘佳尧;;纤维素多孔膜的制备及其性能研究[J];陕西科技大学学报;2019年06期
7 王丽华;韩旭彤;田野;丁怀宇;施艳荞;;可溶性聚酰亚胺规整多孔膜的制备[J];天津工业大学学报;2008年03期
8 丁希楼,张国栋;液相沉积法制备TiO_2多孔膜沉积量的计算[J];安徽工业大学学报(自然科学版);2003年02期
9 旷亚非,王玲,胡飞;铝阳极氧化多孔膜层的界面电性能研究[J];电化学;1998年02期
10 旷亚非,王玲,王美媛;溶液组分对铝阳极氧化多孔膜界面电性能的影响[J];电化学;1998年03期
11 陈自兵;李玲;刘翔宇;王耀;;呼吸图法制备蜂窝状多孔膜形貌的研究[J];新型工业化;2020年06期
12 黄小彬;何泽超;;可降解金属Zn的表面修饰及其性能表征[J];现代化工;2019年S1期
13 张泽中;王国辉;王盈盈;齐青青;李彦彬;;多孔膜袋水力特性研究[J];湖北农业科学;2017年14期
14 张瑛洁;曹天静;林茹;杨榕;袁明园;岳显;张明旭;;聚偏氟乙烯多孔膜制备和改性研究进展[J];东北电力大学学报;2013年03期
15 向珊珊;高秀秋;;壳聚糖-胶原支架与人牙周膜细胞复合培养的实验研究[J];锦州医学院学报;2006年05期
16 田玉明,徐明霞,鄂磊,刘祥志;氧化铝多孔膜的制备及其应用研究新进展[J];化工进展;2005年08期
17 丁怀宇;曾一鸣;孟祥福;田野;矫庆泽;施艳荞;张世民;;热致相分离法制备聚苯硫醚多孔膜 Ⅱ.聚苯硫醚和二苯砜体系[J];功能高分子学报;2005年04期
中国重要会议论文全文数据库 前20条
1 张海玲;朱敦皖;柏金根;冷希岗;;壳聚糖修饰对细胞摄入和细胞毒性的影响[A];天津市生物医学工程学会2007年学术年会论文摘要集[C];2007年
2 鲍斌;朱轩伯;周亚红;;超高离子浓度下Janus三维多孔膜界面上的离子传输行为研究[A];中国化学会第十七届全国胶体与界面化学学术会议论文(摘要)集(第一卷)[C];2019年
3 詹福星;殷鸿尧;冯玉军;;CO_2响应聚乳酸蜂窝状多孔膜[A];中国化学会第十七届全国胶体与界面化学学术会议论文(摘要)集(第一卷)[C];2019年
4 万灵书;;自组装有序多孔膜的研究进展[A];中国化学会第30届学术年会摘要集-第二十四分会:超分子组装与软物质材料[C];2016年
5 崔崑;董鹏;吕弛;;聚苯乙烯-聚(2,2,2-丙烯酸三氟乙酯)-聚苯乙烯嵌段共聚物的合成及其疏水性纤维、多孔膜的制备[A];2016年全国高分子材料科学与工程研讨会论文摘要集[C];2016年
6 杨保军;奚正平;汤慧萍;王培;汪强兵;葛渊;刘忠军;;湿喷涂法制备金属多孔膜[A];2009中国功能材料科技与产业高层论坛论文集[C];2009年
7 李磊;;基于呼吸图法的聚合物多孔膜的制备及功能化[A];2012年两岸三地高分子液晶态与超分子有序结构学术研讨会(暨第十二届全国高分子液晶态与超分子有序结构学术论文报告)会议论文集[C];2012年
8 张科;陈永明;;有机-无机杂化多孔膜的制备[A];2005年全国高分子学术论文报告会论文摘要集[C];2005年
9 万灵书;柯蓓蓓;陈鹏程;李隽巍;徐志康;;有序多孔膜的结构调控与定点功能化[A];2011年全国高分子学术论文报告会论文摘要集[C];2011年
10 解敏;王策;刘新才;;聚多巴胺改性聚醚砜纤维多孔膜的制备与性能研究[A];中国化学会第29届学术年会摘要集——第31分会:静电纺丝技术与纳米纤维[C];2014年
11 万灵书;朱凉伟;吴柏衡;徐志康;;表面孔径小于一百纳米的呼吸图有序多孔膜[A];中国化学会第29届学术年会摘要集——第18分会:超分子组装与软物质材料[C];2014年
12 吴越华;夏钟福;王飞鹏;邱勋林;;充电参数对PTFE多孔膜电荷稳定性的影响[A];首届信息获取与处理学术会议论文集[C];2003年
13 王广金;褚良银;陈文梅;杨平;周明宇;周先桃;曲剑波;谢锐;;微生物固定化载体多孔膜微囊的制备[A];第一届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集(上)[C];2004年
14 田野;刘爽;丁怀宇;王丽华;刘必前;;疏水性聚苯醚规整多孔膜的制备及机理研究[A];2007年全国高分子学术论文报告会论文摘要集(下册)[C];2007年
15 杨红军;胡睿青;皮玉萍;王娜;董侠;王笃金;徐卫林;;微珠诱导相转变法制备聚合物多孔膜[A];2014年全国高分子材料科学与工程研讨会学术论文集(下册)[C];2014年
16 夏钟福;马珊珊;张冶文;朱建伟;Danz R.;Wedel A.;;聚四氟乙烯多孔膜的空间电荷驻极体特性[A];第四届中国功能材料及其应用学术会议论文集[C];2001年
17 高翔;刘丽丽;刘秀凤;张宝泉;林跃生;;超临界二氧化碳在多孔膜中的渗透机理[A];第一届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集(上)[C];2004年
18 王广金;褚良银;陈文梅;杨平;周明宇;周先桃;曲剑波;谢锐;;多孔膜微囊载体固定微生物的性能研究[A];第一届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集(下)[C];2004年
19 成国兴;单丹;薛怀国;;嵌段共聚物纳米多孔膜的构筑[A];中国化学会第26届学术年会纳米化学分会场论文集[C];2008年
20 陈鹏程;万灵书;柯蓓蓓;徐志康;;硼酸修饰有序多孔膜的制备与葡萄糖的检测[A];2011年全国高分子学术论文报告会论文摘要集[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前20条
1 王震;抗菌壳聚糖/聚乙烯醇多孔膜结构调控及气体透过阻力-效率平衡效应[D];天津工业大学;2019年
2 陈海燕;基于PS-b-PAA多孔膜构建微纳功能材料及其应用研究[D];扬州大学;2019年
3 范婷婷;聚苯硫醚多孔膜的制备及其应用研究[D];天津工业大学;2018年
4 杨倩;超薄二氧化硅纳米多孔膜的分子选择性及其电渗流性质[D];浙江大学;2019年
5 崔振宇;聚偏氟乙烯多孔膜结构及其聚合物锂离子电池隔膜的性能[D];浙江大学;2008年
6 孙航;水滴模板法构筑功能性有序多孔膜[D];吉林大学;2009年
7 陈士新;量子点敏化太阳能电池光阳极多孔膜的界面调控研究[D];东北师范大学;2021年
8 沈忱思;壳聚糖和硅铝分子筛的净水功能调控及其机制研究[D];浙江大学;2012年
9 于丽娜;壳聚糖树脂的制备、表征及应用研究[D];中国海洋大学;2008年
10 廖春燕;壳聚糖诱导植物抗病反应及机制研究[D];浙江大学;2002年
11 黎小平;壳聚糖对乙酸诱导的直肠损伤和痔瘘切除术后创面的影响[D];南方医科大学;2015年
12 李彦艳;壳聚糖油酸复合物纳米微球的制备及性能[D];中国海洋大学;2008年
13 刘靖;纤维素酶水解壳聚糖的特性及机理研究[D];江南大学;2006年
14 周惠云;壳聚糖的两种药物缓释体系的建立及性能评价[D];中国海洋大学;2007年
15 钟志梅;含硫、磷壳聚糖新衍生物的制备、结构与抑菌活性关系研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2008年
16 梁娜;维生素E琥珀酸酯修饰的壳聚糖聚合物胶束给药系统的研究[D];沈阳药科大学;2012年
17 张聪璐;离子液体中壳聚糖改性及改性材料的吸附性能研究[D];东北大学;2014年
18 马茂;壳聚糖—类人胶原蛋白海绵的生物相容性及止血效果研究[D];西北大学;2008年
19 贺剑;以壳聚糖为模板原位聚合制备氧化还原活性水凝胶及其应用[D];南开大学;2013年
20 叶盛权;羟丙基壳聚糖亚铁离子配合物吸附特性的研究[D];华南理工大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前20条
1 陆新;胶原—壳聚糖人工皮肤替代物的初步研究[D];浙江大学;2003年
2 胡学庆;胶原——壳聚糖多孔膜的生物相容性研究[D];浙江大学;2002年
3 汤宋佳;壳聚糖—胶原海绵敷料的制备及其对伤口愈合的作用研究[D];浙江大学;2016年
4 朱维波;多糖基共混载药膜材料的制备及性能研究[D];昆明理工大学;2014年
5 周志涵;呼吸图法纤维素基有序多孔膜的制备及研究[D];湖南工业大学;2019年
6 郑秋光;热致相分离法P(VDC-co-VC)共聚物多孔膜制备及性能研究[D];天津工业大学;2019年
7 赵美姣;二氧化硅纳米通道薄膜的限域分子传输研究[D];浙江大学;2019年
8 段宪法;高性能聚合物微纳米多孔膜的制备与控制[D];中北大学;2019年
9 商上;聚苯乙烯蜂窝状多孔膜的制备及应用[D];江苏科技大学;2019年
10 史曦伶;氧(磷)化铜多孔膜电极的制备及尺寸效应研究[D];南京大学;2018年
11 刘倩;高分子蜂窝状多孔膜的构筑和性能研究[D];聊城大学;2018年
12 刘文帅;非织造布增强型聚氯乙烯多孔膜研究[D];天津工业大学;2018年
13 王楚;嵌段聚合物自组装形成多孔膜的计算机模拟研究[D];华南理工大学;2018年
14 闫学超;壳聚糖/β-环糊精/纳米氧化锌复合多孔膜的制备及其对铜离子和刚果红的吸附研究[D];华南理工大学;2018年
15 王国辉;多孔膜袋水力特性实验研究[D];华北水利水电大学;2016年
16 姜寒;非溶剂诱导相分离法制备聚合物多孔膜的计算机模拟研究[D];华南理工大学;2020年
17 仲启智;基于液相沉积法的有序多孔膜表面涂层构建及其性能研究[D];浙江大学;2017年
18 赵潇;超亲水涤纶织物和聚偏氟乙烯多孔膜的制备与应用研究[D];华南理工大学;2020年
19 俞翔;有序多孔膜表面浸润性和粘附性能研究[D];浙江大学;2015年
20 张峰;壳聚糖基多孔膜材料的研究[D];复旦大学;2012年
中国重要报纸全文数据库 前20条
1 本报记者 宋一宁;从小众到大众 胶原抢占数十亿风口[N];医药经济报;2019年
2 本报实习生 李勤;壳聚糖:步入上升通道的“潜力股”[N];中国科学报;2012年
3 记者 魏东;纯壳聚糖纤维实现规模产业化[N];科技日报;2017年
4 本报记者 钊凤荣;我国在世界率先实现纯壳聚糖纤维产业化[N];中国产经新闻;2017年
5 本报记者 郭钇杉;海斯摩尔率先实现纯壳聚糖纤维规模产业化[N];中华工商时报;2017年
6 本报记者 李娟;壳聚糖纤维产业化指日可待[N];中国纺织报;2011年
7 本报记者 雷莉云;壳聚糖微生物饲料添加剂结硕“果”[N];湖南科技报;2006年
8 本报记者 陶璐璐;来自海洋的可持续思考[N];中国纺织报;2014年
9 杨晓明 记者 王静;延长县启动实施“壳聚糖”有机果蔬新品示范项目[N];延安日报;2008年
10 记者 赵宗祥;依法查处“纯金胶原高素能美容丝”[N];中国医药报;2006年
11 本报记者 刘侃;壳聚糖与绿色新工艺[N];科技日报;2002年
12 本报记者 吴红月;壳聚糖成保健功纺原料市场新宠[N];科技日报;2015年
13 记者 陈钢;治疗烧伤烫伤用人工皮肤,愈后几可“无痕”[N];新华每日电讯;2012年
14 记者 杨丽;中国医药城传喜讯 人工皮肤技术首度应用[N];泰州日报;2011年
15 顾介铸 赵荣林;人工皮肤将在泰州产业化[N];新华日报;2010年
16 顾介铸;人工皮肤将在泰州市产业化[N];江苏科技报;2010年
17 记者 唐景莉 通讯员 孙宁华 丁姗;苏州大学用茧丝制“人工皮肤”[N];中国教育报;2011年
18 记者 倪思洁;仿生分级多孔膜助力高效海水提铀[N];中国科学报;2021年
19 记者 朱敏丽;“人工皮肤”在药城实现产业化[N];泰州日报;2010年
20 通讯员 朱丽娟 记者 付毅飞;航天科工成功试制新型气体探测器多孔膜板[N];科技日报;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978