收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

饲料中植物凝集素的检测方法与灭活技术研究

戴大章  
【摘要】: 本课题以植物凝集素(lectin)为研究对象,通过对大豆凝集素(SBA)和植物血细胞凝集素(PHA)的提取、测定和灭活研究以及在昆明种小鼠上的毒性实验,建立了lectin的实验室快速测定方法,探讨了lectin的热敏性及灭活方法以及lectin的对动物的影响和作用机理。 试验一研究了lectin的分离提取与纯化。采用亲和色谱法(affinity chromatography),以N-乙酰-D氨基半乳糖为亲和吸附剂,Epoxy-Sephaose为载体,N-乙酰-D氨基半乳糖-Epoxy-Sephaose为固定相,pH7.2的PBS为流动相对大豆凝集素进行分离纯化。将大豆抽提液吸附于经PBS预平衡亲和色谱柱后,先用PBS流洗至蛋白峰为基线(OD_(280nm)<0.01),然后用含0.2M半乳糖的0.9%盐水洗脱收集洗脱液,将OD_(280nm)大于0.2的各管合并、透析、冰干后即得纯化的SBA。纯化产物经pH8.9(胶浓度7.5%)聚丙烯酰胺凝胶电胶,考马斯亮篮染色,显示出一条着色深的蛋白质着色带。 试验二研究了lectin的测定方法。研究了lectin的血细胞凝集活性与其浓度的关系,探讨了试样粉碎粒度、脱脂方法、脱脂时间、抽提时间、抽提次数等测定条件对测定结果的影响。发现lectin的活力与浓度之间存在高度线性相关(R~2=0.9999)。血凝法测定饲料中lectin的含量时,其理想测定条件为,样品粉碎过40日、样品与30~60℃石油醚或乙醚比例(W/V)1:8脱脂8小时、样品与生理盐水(W/V)1:8抽提8小时。在上述条件下测定,回收率可达88%~102%。经过对8种不同的饲料及原料样品lectin含量的测定,平均相对偏差(%)为0.9~2.4,变异系数CV(%)为1.3~3.3。 葫泣J人·笋/l关·笋夕诊广 试验二测定了PHA对小鼠的L05。。以18一249体重的健康昆明种小鼠为试验动物,在 室温、清洁、笼养、白由采食条件卜,进行真胃灌注PHA,随机分组(雌雄各1,=)进行了二 次。第一次分5组,每组10只小白鼠进行真胃灌注,接毒剂量为0.5一smg/只(25~250mg/kg BW);第二次分3组,每组3只小自鼠进行真胃灌注,接毒剂最分别为10一3Omg/只(0 .5一 1.59/kgBw);第二次分3组,每组3只小白鼠进行真胃灌注,其接毒剂最分别为100~3O0mg/ 只(5~159/k 9 BW)。观察7日后,二次试验的试验组小鼠均无死亡,最高剂量达15000m留kg, 表明PHA对小鼠无急性毒性。 实验四研究了lectin的灭活方法。分别用干热、湿热、酸碱和金属离子四种方法处理人 豆植物蛋自中的人豆凝集素(S BA),探讨了理化处理对SBA活性的影响。120℃以卜的干 热处理不能使SBA的活力明显丧失:而95oC、3Omin,一00oC、20min或一05oC、一omin的 湿热处理,可使SBA的活力完全丧失。在pH 1 .0~4.5或pHg一13范围内提取人豆蛋白质, 可使SBA的活力显著丧失。人豆蛋白抽提液中三价、四价金属离子和部分二价、一价金属 离子也可显著降低SBA的活力。 综上所述,利用亲和色谱法可以获得纯度较高的lectin;采用血凝法可以较快速、简 便地测定饲料中的lectin;PHA对小鼠无致死毒性:在不影响人豆蛋自质品质的条件卜,干 热处理不能除去大豆中的SBA,适宜的湿热、酸碱和金属离子处理能有效钝化大豆中SBA 的活性。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 李友莲,吴海军;植物凝集素对桃蚜生长发育的影响[J];山西农业大学学报;2000年02期
2 戴大章,刘建新,叶均安,吴跃明;饲料中的抗营养因子—植物凝集素的快速检测[J];饲料研究;2003年01期
3 潘科;黄炳球;侯学文;;植物凝集素在病虫害防治中的研究发展[J];农药市场信息;2002年16期
4 李向东;植物凝集素及其防卫作用[J];世界农业;1996年11期
5 戴大章,刘建新,叶均安,吴跃明;饲料中植物凝集素(Lectin)的快速检测方法——血凝法[J];饲料博览;2002年11期
6 王志斌,张秀梅,郭三堆;在转基因植物中利用植物凝集素防治害虫的研究[J];植物学通报;2000年02期
7 王志斌,李学勇,郭三堆;植物凝集素与抗虫基因工程[J];生物技术通报;1998年02期
8 吴楚,王政权;冰冻条件下两种外源植物凝集素对水曲柳幼叶叶绿体外膜的影响[J];湖北农学院学报;2001年02期
9 马秋枝;王幸;刘强;;植物凝集素的抗营养特性及其消除方法[J];兽药与饲料添加剂;2006年05期
10 于敏,王志德,董志芳;植物凝集素(PHA)的提取及血凝效果研究[J];安徽技术师范学院学报;2002年01期
11 于敏,袁萍萍,章莹莹;植物凝集素的部分生物学作用分析[J];安徽农业科学;2002年01期
12 杨俊杰;于惠敏;张海龙;;植物抗虫基因工程的研究[J];山东教育学院学报;2008年03期
13 王昌梅;张丽芬;杨明洁;张田;王敏康;;大白芸豆植物凝集素毒性研究[J];安徽农业科学;2009年28期
14 高莹,瞿礼嘉,陈章良;植物凝集素的分子生物学研究[J];生物技术通报;2000年05期
15 陆春玲,黄倢,李贇;动物病毒受体阻断剂的研究进展[J];中国水产科学;2004年01期
16 张小霞;曹素梅;梁振普;乔冠华;许锋;陈晓慧;;植物凝集素在抗刺吸式害虫转基因工程中的应用[J];植物保护;2010年04期
17 张少斌;刘慧;;农作物抗虫蛋白质工程及其应用[J];安徽农业科学;2006年08期
18 郭春生;于蕾妍;葛蔚;张丽;唐超;王清吉;;芸豆植物凝集素的提取及血凝效果研究[J];中国兽药杂志;2008年01期
19 马员春;马维亮;宋晓华;林志珊;;植物凝集素在作物转基因中的利用现状[J];宁夏农林科技;2010年03期
20 李宝柱;段玉玺;陈立杰;;大豆抗病相关蛋白研究进展[J];安徽农业科学;2006年09期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 韩之明;庄大中;高绍荣;孙青原;宋祥芬;陈大元;;植物凝集素对小鼠受精的影响[A];中国动物科学研究——中国动物学会第十四届会员代表大会及中国动物学会65周年年会论文集[C];1999年
2 秦玉昌;李军国;;饲料加工工艺与质量控制技术研究进展[A];动物营养研究进展论文集[C];2004年
3 傅廷栋;涂金星;张毅;陈常兵;杨祁峰;滕怀渊;牛菊兰;尹经章;;在我国西北部地区麦后复种饲料油菜的研究与利用[A];21世纪作物科技与生产发展学术讨论会论文集[C];2002年
4 李加友;;菌糠综合开发利用进展[A];第二届全国食用菌中青年专家学术交流会论文集[C];2008年
5 张光圣;张嘉保;李春信;王玉平;;西藏植物性饲料矿物元素含量测定[A];第三届全国饲料营养学术研讨会论文集[C];1998年
6 何为;赵忠添;施军;李青;李登明;;鳄龟水泥池养殖试验[A];广西水产研究所论文集(2001—2005)[C];2006年
7 俞路;王雅倩;章世元;;微波能对饲料营养品质及微生物总数的影响[A];中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十次学术研讨会论文集[C];2008年
8 张丽英;王宗义;尚彬如;贺平丽;杨文军;;气相色谱/质谱法同步检测饲料中8种β-受体激动剂[A];中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十次学术研讨会论文集[C];2008年
9 高翔;;生物饲料干燥技术的研究[A];2007年中国水产学会学术年会暨水产微生态调控技术论坛论文摘要汇编[C];2007年
10 张春晓;麦康森;艾庆辉;张璐;;鲈鱼对饲料中叶酸需要量的研究[A];2007年中国水产学会学术年会暨水产微生态调控技术论坛论文摘要汇编[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 冉治霖;水源水中隐孢子虫和贾第虫灭活方式及机理研究[D];哈尔滨工业大学;2011年
2 周斌;假型猪瘟病毒体系构建及衣壳蛋白靶向灭活策略抗猪瘟病毒感染研究[D];南京农业大学;2010年
3 王杰;经动脉肝肿瘤原位灭活的实验和临床研究[D];南京医科大学;2003年
4 王正丽;免疫增强剂对牙鲆(Paralichthys Olivaceu)免疫力和抗病力的影响[D];中国海洋大学;2004年
5 梁文艳;杀灭和降解水中藻细胞与藻毒素的电磁效应[D];北京林业大学;2005年
6 于明超;芽孢杆菌和中草药在凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)饲料中的应用研究[D];中国海洋大学;2007年
7 邓莉萍;藻体对水环境中N、P及重金属Cu~(2+)、Pb~(2+)、Cd~(2+)、Cr~(6+)的吸附特征研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2008年
8 张国斌;胭脂鱼幼鱼适宜蛋白水平及中草药对其非特异性免疫机能的影响[D];华中农业大学;2009年
9 黄峰;大口鲇化学性消化机能研究[D];华中农业大学;2001年
10 张世栋;SPF鸡生产若干关键技术的研究[D];南京农业大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 戴大章;饲料中植物凝集素的检测方法与灭活技术研究[D];浙江大学;2003年
2 王铁岗;中国奶牛饲料利用现状及发展前景[D];中国农业大学;2005年
3 黄水林;重组家蚕杆状病毒表达鱼类生长激素基因[D];苏州大学;2004年
4 李朝绪;相关环境生理因素对草地螟幼虫发育和抗寒能力的影响[D];华南热带农业大学;2005年
5 魏志文;多菌二步发酵法生产高蛋白饲料的研究[D];河北大学;2005年
6 卢建明;米酒糟的综合利用[D];广东工业大学;2005年
7 张丽芳;饲料中喹烯酮的检测方法与鸡粪中喹烯酮及其代谢物的鉴定研究[D];中国农业科学院;2006年
8 孙钢;新疆泰昆集团战略规划与实施(案例)[D];大连理工大学;2002年
9 雷彬;如东县部分地区仔猪水肿病流行病学调查和病理组织学检查[D];安徽农业大学;2008年
10 柏永明;全人工养殖条件下东北林蛙生长发育规律的初步研究[D];东北林业大学;2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 刘霞;干细胞可通过植物凝集素提纯[N];科技日报;2011年
2 彦 萍;过滤器1分钟灭活流感病毒[N];大众科技报;2004年
3 中南大学湘雅医院急诊科教授 罗学宏;天气变冷更要防甲流[N];健康报;2010年
4 贺劲松;北工大利用活性氧消毒机灭活SARS病毒实验成功[N];中国中医药报;2003年
5 夏国良;从“减毒”到“灭活”[N];健康报;2002年
6 张巍 杨东果;把关助禁毒 服务促出口[N];国际商报;2002年
7 江夏;高温、紫外线和常见消毒药可灭活禽流感病毒[N];人民日报;2004年
8 贤人;唐教授谈流感疫苗[N];保健时报;2003年
9 记者 刘军;非典疫苗可望数月内问世[N];新华每日电讯;2003年
10 市第三人民医院肝胆外科主任医师 李宏欣;原发性肝癌的微波原位灭活治疗[N];镇江日报;2008年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978