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肺癌活检组织中PLK1 mRNA表达的研究

应可净  
【摘要】: 研究背景和目的 肺癌是目前世界上最常见的男性恶性肿瘤,是严重威胁人们健康和生命的疾病。研究肺癌细胞生长的关键调节基因,并采用有效的方法“封闭”这些基因,无疑将是肺癌基因诊断治疗的关键途径,也是目前医学研究的热点。近年来,研究发现PLK1(polo-like kinase 1)基因在有丝分裂过程中起重要的调节功能,并且在多种的人类肿瘤包括肺癌中发现PLK1基因表达升高,提示PLK1的增长表达在细胞的增殖中起重要作用,预示PLK1可能是一个新的肿瘤标记物。目前国内未见有人报道在人类肺癌中PLK1的表达情况及与临床的相关性,为 浙江大学博士学位论文 了评价PLKI表达与肺癌临床的相关性,准确定量地分析肺癌中PLKI 的表达水平,我们采用荧光探针实时定量PCR(nuorescent real一time quantitative PCR,FQ一PCR)技术,探讨肺癌与肺良性疾病纤维支气 管镜活检组织中PLK 1 mRNA表达水平,以及PLKllllRNA水平与肺 癌临床病理分期分型之间的相关性。为进一步研究PLKI在肺癌基因 诊断及治疗中的作用提供实验依据。 方法 采用荧光探针实时定量pCR技术[fluoreseent real一time quantitative pCR(FQ一pCR)]检测69例原发性肺癌和25例肺部良性疾 病的PLKllllRNA表达水平,分析其与临床特点的相关性。所有的病 例均来自于浙江大学医学院附属邵逸夫医院门诊或住院的病人,经纤 维支气管镜获取组织标本,经组织病理学诊断为原发性支气管肺癌或 良性病变,所取标本与病理学诊断的标本取自同一部位。69例肺癌 患者男性61例,女性8例,年龄40一80岁,平均年龄62岁;肺部良 J胜疾病组28例,男性20例,女性8例,年龄21一79岁,平均年龄53 岁。69例肺癌患者包括鳞癌34例,腺癌17例,小细胞肺癌18例。 根据UICC 1997分期标准51例非小细胞肺癌包括原位癌1例,I期 4例,11期12例,Illa期16例,Illb期一IV期15例,3例无法分期。 小细胞肺癌包括局限期7例,广泛期n例。良胜病变组中肺结核12 例,慢性炎症16例。所取的活检标本置于生理盐水的试管中,冻于 一80℃保存;经RNA提取,cDNA合成,所得cDNA用于PCR扩增。 荧光探针实时定量PCR检测,并计算出Ct值。相同组织中PLKI和 浙江大学博士学位论文 G妙DH的初始模板量的比值为ZCtGAPDH一CtPLK‘,代表肺癌组织和良哇 组织中PLKI mRNA的表达水平。2%琼脂糖电泳观察DNA条带。 统计学方法数据以均数士标准差(护s)表示,两组间的比较采用 非参数Mann认电itneyU检验。所有数据统计在SPSS 12.0 for windows 版软件包上完成。 结果, 研究结果发现,在肺癌纤维支气管镜活检标本中PLK 1 mRNA表 达为0.124士 0.194,明显高于肺部良性疾病组0.037士0.042,两者比较 具有明显的统计学差异(P=o.03,Mann一Whltney Utest),见表。良性组 均小于0.15,肺癌组有23.1%(16/69)超过该值。 肺癌各病理类型PLKI均数分别为鳞癌0.098士0.146,腺癌0.107 士0.170,小细胞肺癌o,191士0.275,统计分析虽无显著性差异(外0.05, M~一whltney U test),但从分布趋势图来看,小细胞肺癌PLKI mRNA表达水平高于非小细胞肺癌。 PLK 1 mRNA表达水平在肺癌不同TNM分期分别为I期一nla 期PLKI为0.1367士0.2212,Illb期一IV期为0.107肚0.1534。经Mann whi饥eyU检验,两组之间无统计学差异(u=0.484,P二0.555)。 肺癌患者中年龄、吸烟年支与PLK 1 mRNA表达水平的散点图 分析表明无明显的相关性。 结论 1.肺癌活检组织中PLK IlnRNA表达明显高于肺部良性疾病组, 提示PLKI可能是一个潜在的肺癌标记物。 浙江大学博士学位论文 2.肺癌各病理分型之间的PLK 1 mRNA表达水平的均数在小细 胞肺癌组高于非小细胞肺癌组,可能与细胞的增殖活性有关。 3.肺癌不同的TNM分期,PLK 1 mRNA表达无明显的统计学意 4.肺癌患者中年龄、抽烟与PLKI mRNA表达无明显的相关性。


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