肺癌活检组织中PLK1 mRNA表达的研究

【摘要】： 研究背景和目的 肺癌是目前世界上最常见的男性恶性肿瘤，是严重威胁人们健康和生命的疾病。研究肺癌细胞生长的关键调节基因，并采用有效的方法“封闭”这些基因，无疑将是肺癌基因诊断治疗的关键途径，也是目前医学研究的热点。近年来，研究发现PLK1(polo-like kinase 1)基因在有丝分裂过程中起重要的调节功能，并且在多种的人类肿瘤包括肺癌中发现PLK1基因表达升高，提示PLK1的增长表达在细胞的增殖中起重要作用，预示PLK1可能是一个新的肿瘤标记物。目前国内未见有人报道在人类肺癌中PLK1的表达情况及与临床的相关性，为 浙江大学博士学位论文 了评价PLKI表达与肺癌临床的相关性，准确定量地分析肺癌中PLKI 的表达水平，我们采用荧光探针实时定量PCR(nuorescent real一time quantitative PCR，FQ一PCR)技术，探讨肺癌与肺良性疾病纤维支气 管镜活检组织中PLK 1 mRNA表达水平，以及PLKllllRNA水平与肺 癌临床病理分期分型之间的相关性。为进一步研究PLKI在肺癌基因 诊断及治疗中的作用提供实验依据。 方法 采用荧光探针实时定量pCR技术[fluoreseent real一time quantitative pCR(FQ一pCR)]检测69例原发性肺癌和25例肺部良性疾 病的PLKllllRNA表达水平，分析其与临床特点的相关性。所有的病 例均来自于浙江大学医学院附属邵逸夫医院门诊或住院的病人，经纤 维支气管镜获取组织标本，经组织病理学诊断为原发性支气管肺癌或 良性病变，所取标本与病理学诊断的标本取自同一部位。69例肺癌 患者男性61例，女性8例，年龄40一80岁，平均年龄62岁;肺部良 J胜疾病组28例，男性20例，女性8例，年龄21一79岁，平均年龄53 岁。69例肺癌患者包括鳞癌34例，腺癌17例，小细胞肺癌18例。 根据UICC 1997分期标准51例非小细胞肺癌包括原位癌1例，I期 4例，11期12例，Illa期16例，Illb期一IV期15例，3例无法分期。 小细胞肺癌包括局限期7例，广泛期n例。良胜病变组中肺结核12 例，慢性炎症16例。所取的活检标本置于生理盐水的试管中，冻于 一80℃保存;经RNA提取，cDNA合成，所得cDNA用于PCR扩增。 荧光探针实时定量PCR检测，并计算出Ct值。相同组织中PLKI和 浙江大学博士学位论文 G妙DH的初始模板量的比值为ZCtGAPDH一CtPLK‘，代表肺癌组织和良哇 组织中PLKI mRNA的表达水平。2%琼脂糖电泳观察DNA条带。 统计学方法数据以均数士标准差(护s)表示，两组间的比较采用 非参数Mann认电itneyU检验。所有数据统计在SPSS 12.0 for windows 版软件包上完成。 结果， 研究结果发现，在肺癌纤维支气管镜活检标本中PLK 1 mRNA表 达为0.124士 0.194，明显高于肺部良性疾病组0.037士0.042，两者比较 具有明显的统计学差异(P=o.03，Mann一Whltney Utest)，见表。良性组 均小于0.15，肺癌组有23.1%(16/69)超过该值。 肺癌各病理类型PLKI均数分别为鳞癌0.098士0.146，腺癌0.107 士0.170，小细胞肺癌o，191士0.275，统计分析虽无显著性差异(外0.05， M~一whltney U test)，但从分布趋势图来看，小细胞肺癌PLKI mRNA表达水平高于非小细胞肺癌。 PLK 1 mRNA表达水平在肺癌不同TNM分期分别为I期一nla 期PLKI为0.1367士0.2212，Illb期一IV期为0.107肚0.1534。经Mann whi饥eyU检验，两组之间无统计学差异(u=0.484，P二0.555)。 肺癌患者中年龄、吸烟年支与PLK 1 mRNA表达水平的散点图 分析表明无明显的相关性。 结论 1.肺癌活检组织中PLK IlnRNA表达明显高于肺部良性疾病组， 提示PLKI可能是一个潜在的肺癌标记物。 浙江大学博士学位论文 2.肺癌各病理分型之间的PLK 1 mRNA表达水平的均数在小细 胞肺癌组高于非小细胞肺癌组，可能与细胞的增殖活性有关。 3.肺癌不同的TNM分期，PLK 1 mRNA表达无明显的统计学意 4.肺癌患者中年龄、抽烟与PLKI mRNA表达无明显的相关性。