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线粒体DNA与线粒体诊治胰腺癌的应用研究

母德清  
【摘要】: 探讨合并慢性胰腺炎的胰腺癌和类似肿瘤性胰腺炎线粒体DNA突变的意义。我们采用相互重叠的58对引物,利用PCR技术扩增两种病变组织和其各自正常组织的线粒体DNA全序列。使用核苷同源序列分析分析两种病变组织的线粒体DNA的碱基组成。12例胰腺癌组织线粒体DNA全部存在突变,其中1例为异质性突变,9例慢性胰腺炎组织线粒体DAN存在突变。胰腺癌组织中存在185个突变点,发生突变的部位依突变频率分别为D-loop区域(n=11),COⅠ(n=7),ATPase(n=7),ND1(n=6),COⅡ(n=6),ND2(n=4),COⅢ(n=4),ND4L(n=4),ND3(n=3),ND4(n=3),ND5(n=2),ND6(n=2),12sRSA(n=2),16sRNA(n=2)基因,9例慢性胰腺炎组织突变点达70个,突变发生部位分别为D-loop区域(n=6),COⅠ(n=4),ATPase(n=4),ND1(n=2),COⅡ(n=5),COⅢ(n=1),ND4L(n=1),ND3(n=3),ND5(n=1),12sRNA(n=2),16sRNA(n=3)。两种病变组织中以D-loop区域,ATPase6基因,复合体I基因,细胞色素C复合体基因突变最为明显。根据我们这组结果我们认为mtDNA突变在两种病变组织中只是量的差异,单凭mtDNA突变不足认证突变的mtDNA就是胰腺癌,更确切地讲两种病变组织在病变的发展任何一个阶段都存在着线粒体DNA异常的可能,因此也就不可能作为两种疾病的鉴别诊断的标志物。在缺乏其它证据的情况下单凭胰腺组织存在mtDNA突变不足以探讨其临床意义。如果存在着将来患胰腺癌的危险性其意义当然是提高了手术干预的可能性。需要进一步明确的是缺乏可能患胰腺癌的其它证据的前提下mtDNA突变的意义;无胰腺癌证据仅仅是mtDNA突变在类似肿瘤性胰腺炎方面的意义;和有癌变证据而无mtDNA基因突变的情况时又如何看待它。 浙江大学博士学位论文 第二部份 摘要 评价线粒体滩刀了基因整合到胰腺癌细胞核基因组中的意义。我们采用荧光原位杂 交技术了犬乃万夕以线粒体/卿了基因作为探针与刃例合并慢性胰腺炎的胰腺癌, //例类似肿瘤性胰腺炎以及各自正常组织标本,了例可疑胰腺癌术中冰冻组织细 胞涂片标本进行杂交反应。所有的癌组织标本尸乃万反应阳性(在细胞核中检测 出有线粒体刀刀了基因序列),而慢性胰腺炎和正常组织标本为阴。2例术中可疑 胰腺癌冰冻组织细胞涂片卢乃万阳性标本术后证实为胰腺癌。我们认为细胞核中 有线粒体乃公丫基因整合可作为胰腺癌诊断的标志物。


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