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幽门螺杆菌感染儿童胃黏膜T淋巴细胞亚群的研究

李中跃  
【摘要】: 【背景&目的】 幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)是一种定植于人胃黏膜的革兰氏阴性细菌,其与慢性胃炎、消化性溃疡、胃腺癌及MALT淋巴瘤的发生有密切的关系。H.pylori致病机制非常复杂并未完全明了,除了通过本身的动力装置,黏附特性以及各种毒力因子造成对胃黏膜的直接损伤外,在H.pylori感染时其胃黏膜可发现有大量的淋巴细胞及中性粒细胞的浸润。H.pylori感染者胃粘膜分泌IgG的浆细胞增多,局部IgA、IgG浓度增高,循环中特异性抗体、IgA浓度明显高于非感染者,而且在唾液、胃液及粪便中也可以检测到高滴度的抗体。研究还证实,H.pylori感染可直接激活或间接由IL-8诱导刺激中性粒细胞反应,强烈的中性粒细胞反应是引起胃粘膜损伤的一个机制。尽管H.pylori感染后机体可以发生强烈的体液免疫/炎症反应,但H.pylori并不能被根除甚至持续终生。近年来,越来越多的证据显示宿主的细胞免疫应答在H.pylori感染的致病中起关键的作用,但是对H.pylori感染所致特异性细胞免疫应答目前尚无一致的定论,尤其是对H.pylori感染时特异性T淋巴细胞CD4~+/CD8~+和Th1/Th2亚群的变化不同的作者有不同观点。而且对儿童H.pylori感染的细胞免疫应答的研究相对较少。鉴于大多数H.pylori的感染在儿童期获得,而且儿童的生活方式简单,H.pylori感染病程较短,感染的转归、胃黏膜组织病理学改变、相关疾病与成人有不同之处。其细胞免疫可能有会与成人不一致,了解儿童H.pylori感染时的T淋巴细胞亚群的变化对于更进一步明确H.pylori自然感染致病机制有着重要意义。因此,本研究应用流式细胞术检测H.pylori感染儿童局部胃黏膜及外周血的T淋巴细胞亚群CD4~+/CD8~+的变化并与H.pylori者比较,以了解儿童H.pylori感染时的T淋巴细胞亚群的改变,为阐明儿童H.pylori感染时的免疫致病机理提供初步理论数据。 浙江大学硕士研究生论文 .、舀尹””””””— L方法X流式细胞仪直接免疫荧光法测定89例儿童胃勃膜T淋巴细胞亚群,其 中,万砂勿尹i阴性正常胃勃膜组(万刃勿ri nesativen~al mucos匆从砂Iorlwor) 8例,月{刃tori阴性慢性浅表性胃炎组(万次川。ri negative cb旧nic super五c认1 gastritis万刃torl-CsG)27例,万;刃tori阳性慢性浅表性胃炎组(万刃勿ri positive ehronie sul姆rficial gastritis,厅刃勿r扩CsG)44例,万刃tori阳性十二指肠溃疡组 (拄刃勿ri卯sitive duodenal uleer,H.刃IOr勺U)10例,所有病例诊断均经内镜 检查、快速尿素酶试验、组织学检查、细菌培养证实并取胃窦薪膜作淋巴细胞 提取。38例儿童(万刃勿r扩CSG组12例,万刃勿r广DU组5例,厅刃勿r-组21 例)同时抽取外周肝素抗凝静脉血Zml。组织细菌培养阳性或快速尿素酶试验 和组织病理学细菌检查同时阳性者诊断万刃勿ri感染。活检胃窦勃膜4块置无 菌Hank,s液中,经1 mM EDTA(ethylenediamine tetraacetie aeid及lmM DTT (dithiothreitol)37oC消化lh,弃上皮层后在含120U/m 11型胶原酶的Hank,s 液中37℃消化3h,弃去残渣后收集固有层淋巴细胞,淋巴细胞经 CD3一FITC(fluoreseein一isothiocyanate),CD4一PE(R一Phyeoerthrin),CDS一Pe尤P (P erid协in‘IilorophyU一Q一rotein)染色后以CD3设门测定T淋巴细胞亚群。外周 血T淋巴细胞亚群采用微量全血直接免疫荧光法测定。 【结果11、胃勃膜各组CD3+(%)细胞的检出率分别为:厅刃tor汹or组2.5肚0.81; 万刃torl-CsG组为3.4矢2.18;厅刃勿r广CsG组为4.37月.97;厅刃勿r勺U组为 6,5州.71。2、在胃薪膜en3·细胞中,eo4·(o,o)、ens+(峋的相对百分比及 Cn4+/Cns+值分别为:万刃Zdr水or组为23.2肚10.46,39.26士14.29,0.61士0.22; 任刃ZOrfCsG组为23.9肚10.54,49.35士10.45,0.5肚0.23;厅乃初产广CsG组为 40.28士1 1 .35,27.91士8.84,1 .55士0.52;厅刃才。r邝u组为29.46士10.38,52.04士14.40, 0.64切.36。与万刃zor刚or组相比,从酬勿rl-csG/万刃ZOrl*DU局部胃勃膜cDS+ 细胞相对比例明显增加(P0.05);与万刃tor俐。r/H.刃torl-CsG组相比 万刃勿rl*Cso胃豁膜eD4+细胞相对比例增加,CDs+细胞比例下降,Co4+/C ns+ 比例明显上升伊0.01);厅刃勿ri+DU组cDS+细胞相对比例高于H刃tor广csG 组而CD4+细胞的相对比例、CD4+/C DS+比则低于万仍初ri+CSG组伊0.01)。3、 外周血CD3+(%)、C以+(%)、CDs+(%)及e以+/C DS+分别为:厅刃IOrr组 、份 —匆一 为65.27士5.60、33.00士5.69、23.52士5.73、1.50士0.57;H刃IOrl*Cso组为67.79 士6.19、35.77士8.62、22.94士4.50、1.66士0.69;厅刃lor勺U组为65.51士9.86、 35.72士4.67、27.13士11.13、1.48士0.51。T淋巴细胞亚群变化在三组之间无统 计学差异。 【结论】在儿童从砂勿ri感染时,局部勃膜存在明显的T淋巴细胞亚群的异常, 万刃勿r广CsG时以CD4+淋巴细胞增多为主,而伴有十二指肠溃疡时,则以CDS+ 淋巴细胞增多为主,两者免疫反应并不一致。与局部胃豁膜的T淋巴细胞亚群 的变化相比,儿童万刃勿ri感染时全身T淋巴细胞亚群的变化则无改变,


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