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隐孔菌多糖对大鼠变应性鼻炎和鼻黏膜eotaxin mRNA表达的影响

邓俊芳  
【摘要】: 变应性鼻炎(AR)为机体再次接触变应原而呈现的以鼻腔黏膜过敏性炎症为主的一种异常免疫应答,其主要症状有鼻痒、反复性打喷嚏、流涕和鼻塞。有研究表明,气道高反应性也是AR的重要客观体征。这些症状和体征主要由eotaxin和IgE介导的位于鼻腔上皮内的嗜酸性细胞(Eos)活化所引起。多数AR患者的分泌物中均有Eos和其相关介质,它们也可能和许多其它的过敏性疾病有关。Eos在鼻黏膜的聚集是AR的标志性特征,Eos被活化后,主要释放4种碱性颗粒蛋白:主要碱性蛋白(MBP)、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)、嗜酸性粒细胞衍生的神经毒素(EDN)和嗜酸性粒细胞过氧化物酶,它们导致组织损伤并引起气道高反应性。许多炎性介质已被证实可作为Eos的化学趋化剂,但eotaxin则特异性地对Eos具有强大趋化作用。Eotaxin是CC趋化因子家族成员之一,它通过与其特异性受体CCR3结合而发挥作用的,CCR3受体在Eos膜上大量存在。 在工业国家,AR的发病率约占人口总数的15%~20%,其中约有20%~40%会发展成支气管哮喘。因此,有效地治疗AR显得极为重要。AR除了抗过敏和抗炎对症治疗外,近年来免疫治疗药物的研究是一个重点。人们一直希望能寻找到既有皮质激素样作用又无不良反应的成分用于AR的治疗。最近我们发现,隐 浙江大学硕士研究生学位论文 孔菌多糖(CP)可能具备这种的优点。CP是丛隐孔菌分离出来的一种小分子量 的多糖,具有明显的抗变态反应、抗炎和免疫调节作用。AR和哮喘是同一疾病 在呼吸道不同部位的两种临床表现,由于上、下呼吸道的紧密联系,AR患者的 下呼吸道往往也有炎症存在。AR和支气管哮喘有相似的免疫功能异常和变态反 应过程,因此,我们研究了CP对大鼠AR模型症状和体征的改善作用,并通过 鼻豁膜和肺组织的eotaxin mRNA表达水平初步探讨其作用机制,期望能为CP 应用于临床提供部分实验依据。 目的 观察隐孔菌多糖(CP)对大鼠变应性鼻炎的疗效及对鼻豁膜和肺组织中 eotaxin mRNA表达的影响,并探讨其可能的机制,为CP治疗变应性鼻炎提供 实验依据。 方法 一、建立大鼠变应性鼻炎模型:SD品系大鼠192只,分为六组:正常对 照组(n一20);酮替芬组(n一34);eP 27mg·kg一,(n一34);eP gmg·kg一‘(n一犯);eP 3mgkg一’(下36);模型组(n一36)。上述各组除正常组外,均注射抗原+佐剂(卵白 蛋白2 mg混溶于10%氢氧化铝凝胶1 ml中),每只大鼠四足垫、腹股沟、背部 三点及颈部共10点,每点0.0知l皮下注射,同时腹腔注射(ip)0.5 ml,进行 致敏。在致敏后第20天进行局部抗原攻击,用4%卵白蛋白点滴双侧鼻孔,每侧 1即L每天一次,连续6天,正常对照组以等量生理盐水替代。 二、CP对鼻炎症状(打喷嚏和搔鼻)的影响:从致敏第14天开始连续给 药12天:eP各组分别给予 eP 3 mg·kg一I、9 mg·kg一I和27 mg·kg一l灌胃(19),正 常对照组用生理盐水5 mLkg‘l(ig),酮替芬组用酮替芬5 mgkg一,(ig)。然后于给 药第9天观察鼻部症状,观察前用卵白蛋白滴鼻进行抗原攻击,正常对照组用生 理盐水滴鼻,攻击后立即记录30 min内大鼠喷嚏和搔鼻次数。 三、cP对气道高反应性的作用:给药后第12天,用10%水合氯醛3 ml.kg一, (ip)麻醉大鼠;行气管插管及胸腔插管后,将大鼠装入体积容积描记箱内,等 稳定5 min后进行气道阻力(RL)和动态肺顺应性(Cd扣)测定。 四、鼻薪膜和肺组织光镜检查:经RL和qyn测定后的大鼠,股动脉放血处 浙江大学硕士研究生学位论文 死,迅速取鼻呼吸区勃膜,用4OC生理盐水冲净血液和粘液,随机将一侧放入4% 甲醛溶液中固定,石蜡包埋,常规病理切片,HE染色,光镜观察。另侧放入 Eppendorf管中,置一1%’C液氮中冻存,供提取总RNA用。 五、鼻勃膜和肺组织eotaxin mRNA表达:用半定量RT一PCR测定其表达: Trizol常规抽提鼻勃膜和肺组织总RNA,经核酸紫外分析仪检测,根据AZ蒯A280 比值,确定样品中RNA纯度和含量。每个样本取1林g的总RNA逆转录成cDNA。 以卜actin作为内参照进行PCR。PCR产物经1 .5%琼脂糖凝胶电泳后,经数码 凝胶图像分析系统成像、条带密度扫描,计算各组(l oD)(e。taxin入IOD)比值,以此 值表示cotaxin mRNA在组织中的相对含量。 结果 一、eP对鼻炎症状的影响:经eP 3mg·kg一’、gmg·kg一’和27mg·kg一’(19)预 处理后打喷嚏数分别为7.67士4.11、6.5肚4.39和5.88士4.02,与模型组10.5肚4.% 比较有显著性差异(尸0 .05);抓鼻次数分别为25.36士13.08、22.78上巧.37和 18.2牡10.37,与模型组35.0肚14.46比较有显著性差异(P0.05)。 二、cP对气道高反应性的作用:cP gmgkg一’、cP 27mgkg‘’和酮替芬组 可以有效地抑制Mch引起的气道高反应性,与模型组及正常组比较有显著性差 异护0.05或尸0.01)。经eP 3mg·kg一l、gmg·kg一’和27mg·kg一’(19)预处理后,Pes。 值分别为037 gkg一,、044 gkg一l和0.52 gkg”,与模型组0.31 gkg一,比较有显著 性差异(尸0.05);PC25值分别为0.30 gkg一’、0.37 gkg一’和0.46 gkg一‘


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