恶性肿瘤病人血浆中吉西他滨及其代谢产物的血药浓度测定和药代动力学研究

【摘要】：吉西他滨(2，2’—双氟胞嘧啶核苷，dFdC)是一个新型的脱氧胞苷拟似物和核苷还原酶抑制剂。它的结构、性质和代谢途径与阿糖胞苷相似，但抗癌活性强，抗瘤谱广。现已证实对多种实体瘤疗效显著，尤其是对非小细胞肺癌、胰腺癌和乳腺癌，单一用药或联合其它抗癌药物都取得很高的疗效。吉西他滨静脉给药后迅速分布至全身，在细胞内脱氧胞苷激酶的作用下变成活性的吉西他滨三磷酸盐而发挥抗肿瘤作用。吉西他滨的消除与阿糖胞苷相似，与细胞内吉西他滨三磷酸盐的浓度有关，在体内(肝脏、肾脏及其它组织、器官)胞嘧啶核苷脱氨酶的作用下很快转变成无活性的代谢产物(2，2’—双氟脱氧胞嘧啶核苷，dFdU)。 到目前为止，国外已有吉西他滨及其代谢产物(2，2’—双氟脱氧胞嘧啶核苷，dFdU)的血药浓度、细胞内浓度、尿液浓度及脑脊液浓度的测定方法、药动学和药效学研究的文献报道，国内则还未见报道。本实验旨在建立一种快速、灵敏、准确的吉西他滨及其代谢产物体内血药浓度测定方法，并研究该药及其代谢产物在我国恶性肿瘤病人血浆中的药动学模型和血浆中的药动学参数，供我国临床医务工作者在拟定给药方案时参考。 一、RP一HPLC法测定人体血浆中吉西他滨及其代谢产物的浓度 的方法学研究 目的 建立一种测定人体血浆中吉西他滨(dFdC)及其代谢产物(dFdU)血药浓度的 高效液相色谱方法，为研究吉西他滨(dFdC)及其代谢产物(dFdU)在病人体内的药 动学打下基础。 方法 1.醋酸一醋酸钱缓冲液配制:取醋酸按3.089加重蒸馏水I000mL，加冰醋酸1.OmL。 2.血浆样品的处理:取血浆样品lrnL，加内标100尽L(含氟脉昔0.8“g)，混 匀，加甲醇一乙睛(v八l:9)3mL混匀，涡漩lmin后放置smin，离心(3500 rpm， IOmin)，取上清液于60℃水浴放置，氮气吹干，残渣用O，smL流动相溶解，离心 (15000 rpm，lomin)，取上清液，用0.45 pm注射式过滤器过滤，进样SOpL。 3.高效液相色谱条件:色谱柱:Liehrosphers一CI，(4.6mmX25O朋，spm)，流 动相:40Inmol·L一，醋酸一醋酸馁缓冲液(pH=5 .5)一乙睛(v八97.5:2.5)，流速: 0.smL·min一，，检测波长:268nm，柱温:25oC。 4.质谱条件:离子化模式:电喷雾;干燥气流速:氮气，12L·min一‘;干燥气温 度:350℃;雾化气压力:45psi;毛细管电压:3500v:裂解器电压:100v;扫 描范围:50一50om/z。 5.代谢产物(2，2’一双氟脱氧胞嗜咤核普，dFdU)的分离、纯化:取病人血浆样 品ZmL，加乙睛4mL，涡旋lmin后放置smin，于3500 rpm离心10min，取上清 液于60℃水浴放置，氮气吹干，残渣用0.smL流动相溶解，离心(1 5000 rPm， 10min)，取上清液，用0.45 pm注射式过滤器过滤，每次进样100 pL。用于分 离代谢产物(dFdu)的HPLC色谱条件:色谱柱:江苏汉邦Liehrosphers一C，，(4.6mm x250Inln，spm);流动相:水一乙睛(v/v90:10);流速:1.omL·min一‘;进样量: 100 pL:检测波长:253nm:柱温:30℃。dFdU经血浆预处理后在上述色谱条件 下分离，在代谢产物(2，2’一双氟脱氧胞哦睫核营，dFdU)保留时间附近时间段 收集流出的组份，经一60℃冷冻干燥得代谢产物(2，2’一双氟脱氧胞喀陡核 普，dFdU)的冻干粉。 结果 1.用于流动相的醋酸一醋酸按缓冲液，pH=5.5，浓度40rnlno卜L一’。 2.dFdU经血浆预处理后在分离色谱条件下t，在16min附近。周围无色谱峰干扰， 分离度3。经MS鉴定，二极管阵列紫外光谱扫描，并与吉西他滨标准品MS对 照，冻干粉为dFdU。 3.吉西他滨(dFdC)、代谢产物(dFdU)、内标的保留时间分别为17、18和29min 左右，分离度3，峰形良好，分离完全，无血浆杂质干扰。 4.本方法吉西他滨(dFdC)线性范围0.20一10.0 pg·mL一，，二0.9999，方法检测 限为0.10 pg·m IJ一‘(凡刁协4)，定量限为(0.21士0.02)pg·mL一‘(分丁、)10)，方法 回收率为100，1%一106.6%(二15)，提取回收率为91.8一106.6%(二15)，日内精密 度RSD为2.3%一4.0%(二15)，日间精密度RSD为3.2%一5.2%(二15)。 5.本方法代谢产物( dFdU)线性范围0.50一50.0 pg·mL一，，二0.9999，方法检测 限为0.25 pg·mL一‘(瑟弓协4)，定量限为(0.47士0.01)pg·mL一，(‘到飞)10)，方 法回收率为94.8%一100.4%(下15)，提取回收率为93.4一98.6%(IT=巧)，日内精 密度RSD为2.2%一3.6%(于15)，日间精密度RSD为3.5%一4.0%(二15)。 结论 本方法灵敏度高，操作简便、结果准确，可用于人体血浆中吉西他滨(dFdC) 及其代谢产物(dFdU)浓度的测定及药动学研究。 二、吉西他滨及其代谢产物(dFdU)在恶性肿瘤病人血浆中的药 动学研究 目的 研究吉西他滨及其代谢产物(dFdU)在恶性肿瘤病人血浆中的药动学模型和 药动学参数。供我国临床医务工作者在拟定给药方案时参考。 方法 经病理确诊的患者(年龄49~62岁)，给药方案为吉西他滨单一化疗。吉西 他滨按推荐剂量IOO0mg·m一，体表面积给药，将吉西他滨与250mL，0.9%生理盐水 配伍，静脉恒速滴注30min。采用本实验已建立的HPLC法测定给药后不同时间 点的吉西他滨及其代谢产物的血药浓度，血药浓度一时间数据经PKS软件处理， 拟合药动学模型，得出吉西他滨及