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问号钩端螺旋体内化过程中细胞内游离Ca~(2+)水平的变化及细胞凋亡

王焕萍  
【摘要】:背景和目的 钩端螺旋体(简称钩体)病是全世界流行的人兽共患病,致病性钩体侵入人体后能引起急性发热和全身各系统的疾病。钩体病的携带者主要是野生动物或家畜,尤其是啮齿动物、有袋动物、牛、猪和狗。其临床综合症包括亚临床感染、伴或不伴有脑膜炎的无黄疸的自限性发热、潜在性致命的以出血、黄疸、肾衰竭为表现的Weil's综合症。虽然钩体病的致病因素如:脂多糖、脂蛋白、肽聚糖、热休克蛋白及鞭毛蛋白等可能与致病性有关,但确切的致病机制至今未明。 近年来报道,许多致病菌黏附宿主细胞后能引起Ca~(2+)升高,Ca~(2+)可以触发信号传导机制,诱导宿主细胞骨架重排,最终导致细菌内化入细胞。钩体内化细胞时能否引起Ca~(2+)升高及感染细胞的结局如何,尚需要研究。 在以往工作基础上,本研究用Annexin V-FITC/PI染色和流式细胞术检测了活的或紫外杀死的56601株钩体对细胞凋亡的作用;采用Fluo-3/AM胞内游离Ca~(2+)特异荧光标记激光共聚焦技术检测了不同毒力的钩体对宿主细胞胞内游离Ca~(2+)水平的影响及Ca~(2+)的来源:以[~3H]1,3二磷酸磷脂酰肌醇(PIP_2)([~3H)PIP_2)为底物,检测了不同毒力的钩体磷脂酶C(PLC)的活性。 方法将新鲜培养或经紫外线直接照射60 min杀死的56601株钩体分别与Vero和J774A.1单层细胞共孵育1h,用Annexin V-FITC和propidium iodide(PI)染色,按AnnexinV试剂盒操作说明书,用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。活细胞不被染料染色,早期凋


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