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频谱染色体核型分析技术体系的建立及其在产前诊断中的应用

任宇珂  
【摘要】:如何对细小的染色体异常做出准确的核型分析一直是困扰产前诊断技术人员的技术难题之一。传统的染色体显带核型分析由于其分辨率较低,往往难以对复杂易位做出准确判断,而且操作费时费力。荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH)虽然与G带相比具有简便、快速、特异性高等优点,但是FISH技术往往要建立在已知的核型分析基础上,对没有任何可以确定的条带模式的未知染色体异常,检测就变得十分困难。频谱核型分析(SpectralKaryotyping, SKY)这种新式的全染色体着色技术允许在一次试验里使每一条染色体都清楚地按照不同的颜色呈现出来,并进行同步鉴定和分析,而且能识别染色体显带技术和单用FISH难以确认的一些畸变,为准确地诊断复杂核型异常提供了可能。目前,国内对SKY技术研究和临床应用还不够全面和深入,特别是对SKY染色体制片及如何与其他技术有效结合建立可行的操作模式研究比较欠缺。本实验观察并分析了各种实验变化因素对制片过程的影响,以及SKY技术、G带技术和FISH在临床上的应用,以求为制片技术标准化及进一步阐明三者的作用及如何进行有效分析提供思路,并为建立有序的临床诊断规范提供实验依据。 目的: 1.观察滴片高度、固定液比例、滴片方法等因素对SKY制片的影响作用并 浙江大学硕士学位论文 探讨其机制。 2.应用改良后的方法建立适合国情的SKY技术体系应用于临床诊断。 3.探索SKY技术在妇产科领域诊断复杂核型异常中的应用,研究G带、FISH、 SKY技术在产前诊断中的应用并探讨如何建立有效结合的规范流程。 方法: 1.用染色体分裂相大小、交叉数目、破裂频率来评估制片过程中的各种因素 对制片结果的影响。 2.通过蒸汽制片和化学法结合的改进方法与常规方法比较,探索SKY制片问 题的解决方案,从而建立SKY技术体系。 3.应用SKY、F工SH、G带结合分析临床病例,探讨各种技术的作用,及建立 规范的临床诊断流程。 结果: 第一部分SKY制片技术及其可能的影响机制 1.滴片高度Icm到30cm对SKY制片结果影响不大。 2.固定液比例的改变从2:1到4:1浓度对SKY制片结果有一定影响,比 例越大,染色体分裂相破裂越少,但有变小趋势、3:1的比例比较适中。 3.应用改进后的蒸汽法和化学法结合的新方法能使染色体分裂相有效扩 散,并达到制片要求。 4.离心速度对染色体分裂相的质量有一定程度的影响,相对于常规的6OOXg 离心速度,采用24OXg能够有效解决细胞质和杂质残留的问题,使制片 背景清晰。 第二部分SKY技术在临床诊断上的应用及和其他方法的有效结合 建立的适合国情的SKY技术体系能有效应用于临床诊断,在产前诊断中 复杂的染色体异常及标记染色体来源都得到了一一鉴别。 浙江大学硕士学位论文 2.病例1一24,SKY的分析结果与G带相符合,显示为正常的染色体核型。 3.病例25一28:SKY技术在G显带分析结果的基础上进一步揭示出标记染色 体的来源于6,14,16号染色体,FISH证实了SKY的结果。 4.病例29 SKY诊断是正确的,但是需要F工SH技术来确认.G显带分析显示 5号染色体的长臂的末端存在着不明来源的细小的标记染色体,经过DAPI 图像分析揭示这个不知名的片段源于Y染色体,SKY结果清晰的揭示了这 个易位,但是由于荧光信号闪烁的干扰,最后需要FISH确认了这个异常。 5.病例30先进行SKY尝试性诊断,然后选择FISH探针来鉴别标记染色体 的来源。G带结果提示存在着一个小的不明来源的易位,经过SKY技术的 分析,提示标记染色体可能来源于8,11,21号染色体,经过多个图像 的比对,8号染色体的频率最高,通过应用F工SH探针8,n,21,确 定了标记染色体确实来自于8号染色体。 结论: 1、应用蒸汽法和化学法结合的制片方法能够持续稳定地得到高质量的染 色体分裂相,可获得良好SKY制片效果。 2、我们所建立的SKY技术已达到了SKY技术分析染色体必须达到的质量 标准,其分辨率大小可达1.SMB。显色层次分明,已可用于临床诊断。 3、SKY技术能对许多复杂的染色体重排作出快速诊断;而对于不明来源的 标记染色体也能够根据其染色体颜色的不同快速的确定其来源。克服了 传统染色体显带分析技术的缺点和荧光原位杂交技术的局限。SKY技术 不是对G带和FISH技术的简单的替代,而是非常有益的补充。通过三 者的有效结合,可有效地解决产前诊断中的疑难病例的诊断。 4、根据对实验结果的分析和总结,我们所推荐的在产前和产后诊断中比较 合理的染色体分析技术的操作流程是:首先运用G显带分析进行筛查; 其次SKY分析(当需要鉴别标记染色体时);再接着是FISH技术(有怀 疑,需要确诊时),有两点需要注意的是,首先如果G带可以鉴别出明 确的额外染色体的来源时,SKY这一步就可以省略,而应用FISH确认。


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2 施克珠;;在Mersey区和北威尔士细胞遗传学产前诊断及其效果[J];国外医学.计划生育分册;1987年02期
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6 ;核磁共振和超声检查产前诊断显性脊柱裂[J];国外医学.生理.病理科学与临床分册;1994年04期
7 闫英地,吴卫东,周继萍,李聪敏,郝戈芳,才晶,陈春明,王敏峥;543例绒毛细胞染色体产前诊断[J];中华医学遗传学杂志;1995年04期
8 黄瑞萍,汤韧,俞旻;经腹取羊水及脐血检查在产前诊断中的应用[J];实用妇产科杂志;1996年02期
9 章珍珍;;产前诊断 看看腹中胎儿健康吗[J];健康博览;2001年08期
10 万淑梅,余艳红,苏桂栋,张燕;280例β-地中海贫血高风险患儿的产前基因诊断分析[J];现代妇产科进展;2004年05期
11 朱瑞芳,许争峰,胡娅莉,张颖,仲晓玲,郁锋;1005例羊水细胞染色体分析在产前诊断中的应用价值[J];中国优生与遗传杂志;2005年03期
12 梁玉全,周远青,梁瑞莲;反向斑点杂交技术用于β地中海贫血的基因诊断及产前诊断[J];实用医学杂志;2005年15期
13 刘晓翌,肖晓素,樊尚荣,王勇强,杨媛慧,廖立斌;羊水细胞培养用于染色体病产前诊断64例分析[J];中国实用妇科与产科杂志;2005年07期
14 周玉春,王华,黄定梅,彭向京,贾政军,禹虹,雷花香,马晓琦;改良羊水细胞染色体制备法在产前诊断中的效果分析[J];中华医学遗传学杂志;2005年04期
15 钟燕芳;周才;吴菁;郭莉;曾丽;陈燕;陈丹;黄华梅;;106例胎儿血生化指标分析研究[J];中国优生与遗传杂志;2005年12期
16 罗莉;邬晋芳;乞艳华;;孕妇血浆及血清中胎儿游离DNA的研究进展[J];实用医技杂志;2005年24期
17 薛慧琴;罗国容;;引物原位标记技术及其在产前诊断中的应用[J];西部医学;2006年02期
18 ;消息[J];中华医学超声杂志(电子版);2006年01期
19 秦瑞英;侯同秀;;正确认识产前B超检查[J];中国误诊学杂志;2006年15期
20 周凤珍;李明;周霞平;高露露;高素清;柯玮琳;罗军;;胚外体腔穿刺术产前诊断的可行性研究[J];深圳中西医结合杂志;2006年04期
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1 张静引;孙丽洲;肖云山;;改良荧光原位杂交技术在产前诊断中的应用[A];第四届长三角妇产科学术论坛暨浙江省2009年妇产科学术年会论文汇编[C];2009年
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5 李晓侨;姚凤霞;孟岩;王铮;彭园园;佃艳;周青;苏亮;黄尚志;;成人型多囊肾家系基因突变鉴定及产前诊断[A];第八次全国医学遗传学学术会议(中华医学会2009年医学遗传学年会)论文摘要汇编[C];2009年
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1 金华;遗传性并多指家系的致病基因分析及产前诊断[D];山东大学;2012年
2 刘俊涛;侵入性产前诊断技术的系列评估[D];北京协和医学院;2011年
3 袁媛;两种单基因遗传病的致病基因定位及产前诊断[D];武汉大学;2010年
4 董竞梅;先天性心脏病危险因素及产前诊断方法Meta分析[D];华中科技大学;2013年
5 周倩;产前细菌人工染色体标记—磁珠分离法的临床性能研究[D];北京协和医学院;2012年
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1 任宇珂;频谱染色体核型分析技术体系的建立及其在产前诊断中的应用[D];浙江大学;2005年
2 施蕊;产前诊断偏误之民事赔偿责任研析[D];重庆大学;2008年
3 王莹;孕早中期唐氏综合征筛查及297例介入产前诊断数据的分析[D];暨南大学;2010年
4 苗明珠;杂合型单核苷酸多态性定量焦测序分析技术在唐氏综合征快速产前诊断中的应用研究[D];南京医科大学;2011年
5 赵丽;FISH技术在遗传病诊断及产前诊断中的应用[D];苏州大学;2004年
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8 郭奇伟;实时荧光多重探针连接再扩增技术应用于染色体非整倍体的快速产前诊断[D];厦门大学;2008年
9 陈新华;胎儿超声心动图技术的发展与应用[D];河北医科大学;2009年
10 余蓉;单细胞水平实时荧光定量聚和酶链反应在诊断唐氏综合征中的应用探讨[D];华中科技大学;2007年
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1 马秀杰 李湛;产前诊断拦截“缺陷儿”[N];抚顺日报;2009年
2 李春;产前诊断出现曙光[N];福建科技报;2000年
3 金永红;产前诊断不能再随意而为[N];健康报;2003年
4 记者王丹;我国建成快速产前诊断技术体系[N];健康报;2009年
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