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棉铃虫核型多角体病毒ORF128、ORF135等基因的特性分析

安世恒  
【摘要】:棉铃虫核型多角体病毒(Heliocoverpa armigern nuclear polyhedrosis virus,HaSNPV)是棉铃虫专一性病原微生物,在害虫生物防治中具有很大的应用前景。随着分子生物学的发展,HaSNPV C1株和G4株的基因组全序列已经测定。目前,有许多基因的功能被了解清楚,例如,polyhedrin、late gene expression factor 2(lef-2)、basic DNA-binding protein(BDBP)、Ha122、Ha94、Ha29、Ha33等,但仍有许多基因的功能是未知的。在这篇论文中,作者分析了几个基因,为下一步功能的分析打下基础。本论文的主要结论如下: 1.HaSNPV ORF128的初步分析 在HaSNPV-C1株基因组中,Ha128位于120,252和121,052 bp之间,编码266个氨基酸残基,预测分子量为30.5 kDa.Ha128的同源蛋白存在于所有已测序的鳞翅目昆虫的杆状病毒中,但没有发现其同源蛋白存在于颗粒体病毒和其他非鳞翅目昆虫的杆状病毒中,因而可能作为鳞翅目NPV特有的一个基因。Northern blot分析发现Ha128的转录本在病毒侵染宿主细胞(HzAMl cells)24 h后被检测出来,一直持续到122 h仍能被检测出来。利用自制的抗体进行western blot分析发现,Ha128基因表达的蛋白在病毒侵染宿主后24 h被检测出来,一直持续到120 h仍能检测出来,这些结果说明在病毒感染宿主的过程中Ha128是一个晚期表达的基因。Western blot也发现Ha128基因的表达产物大约是31 kDa,与预期的大小相一致,说明Ha128基因的表达产物没有经过大的后加工修饰。免疫荧光分析发现Ha128主要位于宿主细胞的细胞质中。Pull-down和免疫共沉淀分析发现至少有两个宿主蛋白可以与Ha128蛋白互作。总之,Ha128是一个晚期表达的基因,表达的产物位于宿主细胞的细胞质中,可能直接与宿主蛋白进行互作。 2.Ha128同源基因苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)ORF17的初步分析 AcMNPV是昆虫杆状病毒研究中的一个模式种,AcMNPV ORF17(Ac17)是鳞翅目NPV的一个核心基因,是Ha128的同源基因。计算机分析显示,在Ac17基因编码的氨基酸序列中发现一个casein kinase Ⅱ phosphorylation位点(位于aa 69-72)、两个N-glycosylation位点(位于aa 78-81,158-161)和一个N-myristoylation位点(位于aa 151-156),但没有其他任何显著的motif被发现。RT-PCR分析揭示Ac17的转录本在病毒侵染宿主后3 h就能被检测出


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