广西杂草双生病毒的分子鉴定

【摘要】：双生病毒是植物病毒中唯一的一类具有孪生颗粒形态的单链环状DNA病毒,已在多种重要经济作物上引起危害。我国已从云南、广西等地的烟草、番茄和番木瓜等作物上相继发现了多种双生病毒,并对其基因组结构及变异进行了深入研究。杂草因其种类多、分布广、具有很强的环境适应性,是双生病毒重要的原始寄主或中间寄主,因此对双生病毒的传播扩散、重组变异及进化有极其重要的作用。为了弄清杂草上双生病毒的发生与分布,我们从广西地区杂草上采集了双生病毒样品并对病毒进行了分子检测与鉴定。 从5种常见杂草上采集了28株表现典型病毒症状的样本,用双生病毒的简并引物PA和PB进行了PCR检测,将扩增到的约500 bp的片段经过克隆和序列测定表明,22个样本为粉虱传双生病毒,序列比较发现这些病毒分离物至少有5种病毒类型。因此从每种病毒类型中选取代表,共对8个分离物的基因组结构进行了研究。 对草龙上的病毒分离物G37和G38的基因组进行全序列测定,G37和G38DNA-A全长分别为2758和2745个核苷酸(nts);序列比较表明,G37与台湾胜红蓟黄脉病毒(AYVTV)的相似性最高,为73%;G38与中国胜红蓟黄脉病毒(AYVCNV)的相似性最高,为65%。根据双生病毒分类原则,G37和G38是Begomovirus的两个新种,将G37命名为草龙黄脉病毒(iudwigia yellow vein virus,LuYVV),G38命名为中国草龙黄脉病毒(Ludwigiayellow vein China virus,LuYVCNV)。用DNAp的特异性引物beta01和beta02进行DNAO分子的PCR检测,发现LuYVV伴随有卫星DNAp分子,其分子大小为1347 nts,与其它病毒的DNAβ的相似性较低,仅为32.4-50.2%。 对胜红蓟上的分离物G47、G52和G68的基因组进行了测序,G52和G68DNA-A全长分别是2735、2740 nts,G47部分DNA-A序列是1743 nts;序列比较表明,G47和G68分别与中国番木瓜曲叶病毒(PaLCuCNV)和中国胜红蓟黄脉病毒(AYVCNV)的相似性最高,分别为99%和98.1%,因此,G47为PaLCuCNV的分离物,G68为AYVCNV的分离物。G52 DNA-A与AYVCNV的相似性最高,为85%,因此G52是Begomovirus的一个新种,将G52命名为胜