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云南番茄双生病毒鉴定及烟草曲茎病毒致病分子机理研究

李正和  
【摘要】:双生病毒是一类具有孪生颗粒形态的植物单链DNA病毒,目前已在多个国家和地区的作物上造成毁灭性危害。近年来,我国华南各省作物上双生病毒病害的发生有逐年加重的趋势。本文对云南番茄上的双生病毒类群以及烟草曲茎病毒(TbCSV)的致病分子机理进行了研究。 从云南省采集了23个的番茄曲叶病的样品,TAS-ELISA和部分序列分析发现它们属于不同的种类。测定了四个分离物(Y25、Y41、Y72和Y161)的全序列,同源性比较和进化分析表明,Y25、Y41、Y72和Y161分别属于四种不同的病毒,即中国番茄黄化曲叶病毒(TYLCCNV)、TbCSV、泰国番茄黄化曲叶病毒(TYLCTHV)以及云南烟草曲叶病毒(TbLCYNV)。所有TYLCCNV和TYLCTHV的分离物都发现伴随有卫星DNAβ分子,而属于TbCSV和TbLCYNV的几个分离物都没有检测到卫星的存在。测定了Y25、Y72、Y77和Y79伴随的DNAp的全序列,比较发现,Y25p与其它TYLCCNV分离物伴随的卫星紧密相关,而Y72β、Y77β和Y79β属于一类新的卫星分子,与TbCSV卫星的同源性最高。 田间调查发现,在42个TbCSV侵染的样品中,仅13个分离物伴随有卫星分子。对其中一个伴随DNAB的分离物(TbCSV-Y35)进行的致病性分析表明,TbCSV-Y35单独能够在本氏烟和自然寄主普通烟上产生严重的上卷症状,且子代病毒能够被烟粉虱传播,表明TbCSV-Y35单独能够在田间维持病害的发生。当与卫星共同接种时,TbCSV-Y35能够在其烟属(Nicotiana)寄主上产生更为严重的下卷症状。然而在番茄寄主上,卫星对于TbCSV-Y35诱导的症状没有影响,且辅助病毒不能稳定的维持卫星的存在。与其它双生病毒/DNAβ病害复合体不同,卫星对于TbCSV-Y35的核酸积累、侵染效率、发病时间和寄主范围都没有影响。对另一个不伴随卫星的分离物(TbCSV-Y1)进行研究发现,TbCSV-Y1能引起和TbCSV-Y35相似的症状,且能与DNAp进行功能性的互作。这些结果表明,TbCSV DNAβ并非辅助病毒系统侵染所必需的,但能以寄主专化性的方式加重病害的症状。 利用Overlap Extension PCR的方法,将TbCSV-Y35 C4 ORF上2422和2440


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