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若干芸薹属植物种间杂交与植株再生及其遗传评价

张国庆  
【摘要】:1.利用41个微卫星引物对11个中国甘蓝型油菜和12个欧洲甘蓝型油菜进行PCR分析,共产生了50个多态性位点。对50个位点分析,等位基因在1到14个,平均为2.7个。SSR标记分析表明,一个标记可以区分14个不同的DNA片断。对图谱的聚类分析清楚表明,可将所有油菜基因型分为3组,其中一组全为瑞典油菜,另外两组是中国油菜。且中国油菜较瑞典油菜具有广泛的遗传多样性。瑞典油菜品种间的遗传相似性在69.5-95.6%之间,且遗传距离较小;而中国油菜的相似性则在57.1-81.6%,且遗传距离较大。试验结果表明,可以通过选择合适的微卫星引物对甘蓝型油菜杂交亲本进行选择,并对杂交优势进行预测。 2.将甘蓝型油菜与芥菜型油菜进行正反交,通过对杂交子房培养获得其再生植株。试验结果表明,芥菜型油菜与甘蓝型油菜(Ames 24521×沪油15,Vittasso×浙双72)杂交子房培养效果好于其反交。取授粉后15d的杂交子房进行培养,其植株再生率高于授粉10d后的杂交子房培养,而产生的愈伤组织则少于授粉10d的杂交子房培养。同时,对培养基筛选结果表明,以MS为基本培养基,附加0.3mg/L NAA和1.5 mg/L BAP,与0.3 mg/L NAA和2.0 mg/L BAP,子房培养效果较好,其愈伤形成率和植株再生率分别达到55.43%和26.65%与66.98%和24.61%。 3.以白菜型油菜Hauarad(708)、茅山-3(714)及油白(715)和甘蓝京丰一号(6012)为供体材料,对白菜型油菜与甘蓝杂交种进行胚胎挽救研究。结果表明,取授粉后不同天数的子房进行培养,获得的种子数不同。不同杂交组合所获得的种子数存在明显差异。结果还表明,结籽率与培养基类型和组合方式有关。对所获得的种子在分化(萌发)培养基上培养表明,来自于杂交715×6012的种子萌发效果最好,种子萌发率达66.7%;并在生根培养基上得到了再生植株,对获得的再生植株进行初步细胞学鉴定,结果表明其单倍体的染色体数均为19,为真杂种。 4.以白菜型油菜和甘蓝杂交子房培养获得的再生苗为供体材料,研究影响再生苗生根和成活率的因素。再生根数和长度与培养基类型和培养时间有关,且当培养时间超过14 d,根数与根长则不再发生明显变化。试验还表明,不同基因型和培养时间的再生苗的叶片数和最大叶宽差异不显著。将再生苗转移到炼苗室进行锻炼,炼苗8d,再生苗的成活率可以达到80%以上,好于炼苗4d的再生苗的成活率。试验利用秋水仙碱直接对再生植株浸根进行加倍处理,结果表明,随着秋水仙碱浓度提高和处理时间的延长,其加倍率也随之提高。 5.试验以42份不同油菜材料为研究对象,进行小孢子培养,结果表明,不同材料其小孢子培养反应能力存在差异,胚产量不同。直接从大田取材研究了温度对小孢子胚产量的影响,试验结果表明,材料ZU5138、ZU5218、ZU5313和ZU5325在8-10℃取其花蕾进行小孢子培养,效果最好,而材料ZU5207则在11-15℃取材进行培养效果最好,其胚产量达到了219.3胚/花蕾。试验还表明,花蕾大小也是影响小孢子培养效果的一个重要原因,对于材料ZU5207和ZU5325,取处于花瓣与雄蕊比例为1/2的花蕾进行小孢子培养效果最好,其胚产量分别达到了314.0和48.6胚/花蕾。另外,热击组合试验表明,材料ZU5138,ZU5218和ZU5313的小孢子分离后,在32℃下热击培养3 d的效果好于30℃下热击培养7 d。


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