一个侵染浙贝母的马铃薯Y病毒属新成员——浙贝母花叶病毒的鉴定

【摘要】：浙江省宁波市和磐安县栽培的浙贝母(Fritillaria thunbergii Miq,Thunberg fritillary)植株表现花叶或斑驳症状。用略作修改的常规线状病毒提提方法从病叶 中提取出一种线状病毒,经过一系列鉴定,确定为马铃薯Y病毒属的一个新种, 暂命名为浙贝母花叶病毒(Thunberg fritillary mosaic virus,TFMV)。 该病毒粒子长约750 nm,直径12-13 nm,略弯曲。病叶细胞质中含有马铃 薯Y病毒属成员特异的柱状(风轮状)内含体和长的簿片状聚集体。用SDS-PAGE 方法确定该病毒CP的相对分子质量为32 kDa。除浙贝母外,摩擦接种该病毒于 17种广泛应用的指示植物均不表现症状。该病毒CP与26种来自5个不同属病 毒的CP无血清学关系。Western blot、对流免疫电泳和火箭免疫电泳可以定性检 测病叶中的浙贝母花叶病毒,而免疫扩散和ELISA方法不适合该病毒的检测。 分别测定了浙贝母花叶病毒宁波和磐安分离物的基因组全序列。宁波分离物 (序列登录号AJ851866)和磐安分离物(序列登录号AJ885005)的基因组均由9723 个核苷酸组成(不包括polyA尾),均具有单一开读框。二者全序列高度同源, 全序列核苷酸同一性为98.1%,多聚蛋白氨基酸序列同一性为98.0%,可以肯定 两个分离物属同一种病毒。计算机分析揭示,二者有相同的基因组结构,开读框 均起始于第107-109位的第一个AUG起始密码子,均终止于第9494.9496位UGA 终止密码子,均编码一个由3129个氨基酸组成的的多聚蛋白,相对分子质量为 354.4 kDa,3’-NTR长224个核苷酸。 TFMV基因组结构具有典型的马铃薯Y病毒属成员的基因组结构特征,它 的多聚蛋白裂解位点分别是IKEF/S(P1/HC.Pro)、YRVG/G(HC-Pro/P3)、YIFQ/A (P3/6K 1)、MKFQ/S(6K 1/CI)、LHFQ/S(CI/6K2)、YSFQ/A(6K2/NIa-VPg)、LVFE/S (NIa-VPg/NIa-Pro)、WNFQ/A(NIa-Pro/NIb)和。FCFQ/A(NIb/CP)。推测的CP由 269个氨基酸组成,相对分子质量为30.7 kDa,与SDS-PAGE测定的结果相似。 用TFMV基因组全序列与39种其他马铃薯Y病毒属成员的全序列进行同一 性比较和系统进化树分析。TFMV与百合斑驳病毒(Lily mottle virus,LMoV)在 6K1、VP2和NIb区域最相似,全长多聚蛋白氨基酸序列的BLAST搜索显示 LMoV与TFMV关系最近,两者ORF氨基酸序列同一性为53.0%,核苷酸序列 同一性为56.7%。全长多聚蛋白氨基酸序列系统进化树分析揭示TFMV与韭葱 黄条病毒(Leekyellow stripe virus,LYSV)、LMoV、菜豆黄花叶病毒(Bean yellow mosaic virus,BYMV)和三叶草黄脉病毒(Clover yellow vein virus,ClYVV)具 有明显的成簇关系,特别与LYSV成簇明显。LYSV和LMoV同样侵染百合科单 子叶球茎植物。 将TFMV与82种马铃薯Y病毒属和黑麦草花叶病毒属成员基因组3’-末端 编码序列(部分NIb和全长CP基因)进行系统进化树分析。结果表明TFMV与石 蒜轻斑驳病毒(Lycors mild mottle virus,LyMMoV,AF399672)关系较近,二 者3’-末端序列核苷酸同一性为69.1%,CP基因核苷酸序列同一性为72.8%。