生物防治用途芽孢杆菌对水产条件致病菌抑制作用与对中华绒螯蟹、日本沼虾及中华鳖保护效果的评价

【摘要】：芽孢杆菌Bacillus作为一类重要的生防细菌,在禽畜的生物防治中已获得广泛研究 和应用,但在水产养殖,尤其是淡水渔业中才刚起步,对其筛选、效用评价都尚缺规范 和标准。本研究以广泛存在于淡水中的条件致病菌——气单胞菌为对象,进行了七株芽 孢杆菌的拮抗性筛选试验,优化了当选Bs01菌株的培养和发酵条件,并就芽孢菌培养 物对中华绒螯蟹Eirocheir sinensis大眼幼体、日本沼虾Macrobrachium nipponnensic、中 华鳖Trionyx sinensis等水产动物进行了较深入的室内生物测定和养殖保护效果评价,以 期推动我国生防菌剂在淡水养殖业的应用。 基于拮抗性测定的菌株筛选和培养条件优化 以实验室分离获得的七株芽孢杆菌 对普遍存在于各种养殖水体的三株条件致病的气单胞菌进行平板拮抗测试,均表现显著 抗菌效应。对所试三株病原菌的总抑制效果以Bs01菌株最佳,24 h抑菌环平均直径为14.6 f10.7～21.3)mm:Bs03菌株次之,抑菌环为12.9(10.7～17.2)mm;Bs04和Bs05菌株的抑 菌效果略低于Bs03;而其余3株芽孢菌的抑菌环平均直径仅为8.5～9.5 mm,显著低于其 他菌株。而不同气单胞菌株对芽孢菌的敏感性也表现差异,以嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila CL99817菌株对供试芽孢菌最为敏感(抑菌环平均达14.9 mm),而温和气单胞 菌A.sobria TL97424菌株和嗜水气单胞菌QXS-1菌株的敏感性相对较弱(抑菌环均值小 于10.0 mm)。芽孢杆菌Bs01对病菌的拮抗效应并不完全取决于菌群浓度本身,其发酵液 中的代谢产物也具有显著的拮抗效果,去除Bs01菌液中的活菌,其上清液仍对CL99817 菌株表现较强的抑制作用,在常温中性条件下,发酵液上清对该病菌的抑制效果可达 85%以上。在对Bs01菌株培养条件的优化试验中,pH、装量、温度和养分都能影响发 酵液菌群浓度,以pH 7.0最适宜菌株生长,培养24 h后的活菌量达21.6×1 O~8CFU/ml,是 pH 4.5条件下生长量(O.58×10~8CFU/ml)的40余倍,比pH 5.5和8.5下的生长量高出3倍左 右:最适装量和培养温度分别为40%和35℃:而基础肉汤培养液中添加0.5%葡萄糖是芽 孢杆菌Bs01菌株的适宜培养基。 芽孢杆菌对中华绒蟹蟹大眼幼体的保护作用评价采用在养殖水体中接菌的方法, 设置3个剂量处理、1个生防菌单独处理、1个嗜水气单胞菌CL998 17单独接种处理及 1个清水空白对照,接种剂量规范为单位体积水体所含的菌落形成单位即活菌数 (CFLUml),4次重复,每重复包括20只大眼幼体。结果表明,纯病原菌处理和清水对