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远志中皂苷类免疫佐剂活性成分的分离及活性评价

孙红祥  
【摘要】:远志为远志科植物远志(Polygala tenuifolia Willd.)或卵叶远志(P. sibirica L.)的干燥根。远志味苦、性温,归心、肾、肿经,具有安神益智、祛痰、消肿等功效,用于心肾不交、失眠多梦、吐痰不爽、健忘惊悸、乳房肿痛。远志属植物化学成分包括皂苷、山酮、寡糖酯、生物碱、黄酮类、苯丙素类、香豆素等。药理实验和临床研究表明,远志属植物具有镇咳祛痰、镇静和抗惊厥、抗氧化和抗衰老、降压、抗痴呆和脑保护作用、抑菌和抗炎、抑制酒精吸收、免疫增强及免疫佐剂、抗精神病、调血脂、抗凝血、抗血栓及抗肿瘤等多种生理活性。在前期工作中,我们选择具有免疫调节作用、并富含三萜皂苷的远志、三七、黄芪等八味中药,比较了这些中药总皂苷的溶血性及其对OVA受免小鼠细胞免疫和体液免疫应答的影响,发现远志总皂苷(P. tenuifolium saponins,PTS)不仅免疫佐剂活性较 Quil A显著,且其溶血性远较Quil A小。本课题在此基础上,应用现代天然药物化学技术及免疫学方法,以免疫佐剂活性评价为导向,对远志总皂苷中的免疫佐剂活性成分进行定向追踪筛选,分离得到6个具有显著佐剂活性的皂苷,采用化学方法和包括ESI-MS、~1H-NMR、~(13)C-NMR、~1H-~1H COSY、HMQC及HMBC谱等多种光谱技术确定了化学结构,并对这6个皂苷化合物进行了免疫佐剂活性评价。 1.提取与分离 远志干燥块根用70%乙醇回流提取,乙醇提取物用乙醚脱脂后,以水饱和正丁醇萃取,得到远志总皂苷(PTS)。PTS中免疫佐剂活性最强的流份B经硅胶柱色谱、Rp-18柱色谱及半制备HPLC分离、纯化,得到化合物1-18。 2.结构测定 采用化学方法和包括ESI-MS、HRESI-MS、~1H-NMR、~(13)C-NMR、~1H-~1H COSY、HMQC及HMBC等光谱技术分析测定化合物1-18的化学结构。化合物1-6为皂苷类化合物,7-12为五糖酯类化合物,13-18为二糖酯类化合物。其中皂苷tenuifolisaponin A(4)、B(5)、五糖酯tenuifoliose R(12)、二糖酯tenuifoliside F(14)为新化合物,polygalasaponin ⅩⅩⅧ(3)、ⅩⅩⅦ(6)和glomeratose B(16)为首次从植物远志(P. tenuifolium)根中分离得到。 3.溶血性试验 采用比色法测定6个皂苷化合物引起兔红细胞50%溶血浓度(HD_(50)值)。结果表明:6种皂苷除化合物6外,其余5种皂苷的溶血性均显著低于Quil A(p0.001),化合物3的溶血性最小,几乎无溶血作用。


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