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应用单克隆抗体评价稻田天敌的捕食作用

赵伟春  
【摘要】:本文在国内外首次制备出了分别针对褐飞虱Nilaparvata lugens和稻田多种弹尾虫Collembola复合种群的单克隆抗体,并应用褐飞虱、弹尾虫和白背飞虱Sogatella furcifera的单克隆抗体结合田间调查资料评价了弹尾虫在稻田生态系统中的作用及主要捕食性天敌对褐飞虱和白背飞虱的控制作用。结果如下: 1) 应用杂交瘤技术,制备了4 株褐飞虱的单克隆抗体细胞株,分别命名为3B2、3B11、3H3 和4B8。4 种抗体的效价均在4.096×106 倍以上。它们只与褐飞虱所有虫态发生反应,不与稻田其它主要昆虫和蜘蛛发生交叉反应,其中以3H3 和4B8 的特异性更高。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot 印迹分析表明,3B2 和3B11 只与褐飞虱287 kDa 的多肽结合,3H3 和4B8 与215、199 和167 kDa 的三条多肽具有亲和性。在25℃下,1 头褐飞虱怀卵雌成虫与3B2、3B11、3H3 和4B8 结合的多肽在拟环纹豹蛛肠道中的可测定时间分别为1.460d、0.477d、0.367d 和1.913d,分别相当于35.04h、11.45h、8.81h 和45.91h。4 种单克隆抗体均为IgG3亚类。根据上述结果,初步确定4B8 用于捕食作用研究。 2) 应用杂交瘤技术,制备了5 株多种弹尾虫复合体的单克隆抗体细胞株,分别命名为1B5、2F10、2G12、3D8 和4F8。5 种单克隆抗体的效价均达到1.024×108倍以上。它们只与弹尾虫发生反应,不与稻田中被检测的其他昆虫种类和蜘蛛发生交叉反应。应用免疫双扩散法鉴定抗体类型及亚类的结果表明,1B5、2F10、3D8 和4F8为IgG3亚类,2G12 为IgG1亚类。 3) 应用褐飞虱单克隆抗体3B2 和4B8 比较了直接、间接和多种抗体夹心ELISA方法。结果表明:捕食者浓度对直接和间接ELISA 检测结果的影响大于抗体夹心法。当拟环纹豹蛛浓度为0.042mg/ml(鲜重)时,直接和间接ELISA 检测的OD 值比不加拟环纹豹蛛的阳性对照仍降低5%以上。而当捕食者浓度为0.214mg/ml 时,对同种单抗、异种单抗和两种单抗混合夹心ELISA 检测OD 值的影响均在5%以下。当捕食者浓度为0.214mg/ml 时,抗体夹心ELISA 的检测灵敏度高于直接和间接ELISA。同种单抗、异种单抗和两种单抗混合夹心ELISA 检测灵敏度均为16.91ng/ml(1/17509 头褐飞虱怀卵雌成虫/ml),直接和间接ELISA 分别为67.59ng/ml (1/4378头/ml)和135.2ng/ml (1/2189 头/ml)。建立了4B8 稀释1000 倍(28.130μg/ml),捕食者匀浆液定容至100ml/头,HRP-4B8 稀释4000 倍(1.045μg/ml)的夹心ELISA 用于检测捕食者对褐飞虱的捕食作用。在此检测系统下,检测的灵敏度为每头拟环纹


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