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高聚原花青素的水解工艺研究

魏冠红  
【摘要】:本文介绍了葡萄籽原花青素的结构、理化性质、生化药理活性、各种分析方法和提取纯化工艺,并分别以盐酸、醋酸和Ⅰ号强酸性树脂为水解介质,对纯化工艺中所分离的高聚体原花青素(PPC)的水解工艺进行了研究。该工艺以平均聚合度和过氧化值为指标,通过对水解体积比、水解温度、水解时间等方面的考察,确定了相对较优的水解条件:最佳介质为Ⅰ强酸性树脂,水相与树脂最佳体积比为1:1,最佳温度为70℃,反应时间120min。此条件下高聚体的平均聚合度从6.26下降到2.30,水解产物的HPLC-MS分析表明(+)-儿茶素和(-)-表儿茶素总含量由水解前的1.33%上升为27.87%,二聚体、二聚单酯、三聚体分别约增加到原来的11倍、20倍、8倍。 水解实验中建立了两种检测手段——改良香草醛法测定平均聚合度和HPLC-MS法分析原花青素低聚体成分。前者一方面以传统的香草醛法来测定原花青素的质量;另一方面以乙酸为溶剂,使香草醛只与原花青素末端黄烷3-醇反应来测定原花青素的物质的量,从而通过对比获得原花青素的平均聚合度。优化后测定原花青素样品物质的量的线性浓度范围为0.028-0.345μmol/mL,最低检测限为2.97×10~(-4)μmol/mL,加标回收率为95.2-99.6%,精密度RSD为0.78%-0.98%。通过该法测得的样品平均聚合度与实际值接近,具有简单、快速、准确、灵敏等优点。后者以乙腈-1%醋酸水溶液为流动相在ZORBAXSB-C_(18)柱上进行梯度洗脱分离,在电喷雾电离负离子模式下采用选择离子监测模式(SIM)将几种低聚体进行了选择性的分离。结果所检葡萄籽低聚体中共含有(+)-儿茶素、(-)-表儿茶素和(-)-表儿茶素没食子酸酯3种单体,8种非酯型和4种没食子酸酯型共12种二聚体及4种非酯型三聚体等。建立的方法可以较好地解决葡萄籽中各种低聚原花青素的定性检测,了解提取物中原花青素的成分,可用于水解产物的辅助检测。


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