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《浙江大学》 2006年
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烟草与番茄TOM类基因克隆与功能初步分析

陈冰  
【摘要】:在植物中已发现一些寄主因子与病毒的复制有关,如拟南芥中的AtTOM1基因与烟草花叶病毒(TMV)的复制相关。本论文根据拟南芥、番茄和水稻中的TOM1基因序列设计简并引物,利用RT-PCR手段在本氏烟及番茄中扩增了TOM1基因的同源序列片断(NbTOM1和TTOM1),通过序列比较发现这两个片断与其它几种植物中TOM1类基因都有较高的同源性。分别将NbTOM1和TTOM1引入中国番茄黄化曲叶病毒卫星分子改造的沉默载体(DNAmβ),获得了重组载体DNAmβ:NbTOM1和DNAmβ:TTOM1。将DNAmβ:NbTOM1与中国番茄黄化曲叶病毒共同接种本氏烟,Northern blot分析证明病毒诱导NbTOM1沉默后,几乎完全遏制了本氏烟中TMV的复制,并且,半定量RT-PCR分析发现本氏烟中NbTOM1 mRNA的积累几乎被完全遏制。本论文证明通过沉默NbTOM1是一种有效的获得抗TMV植株的方法,同时表明病毒诱导的基因沉默是一种切实有效的鉴定基因功能的工具。
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