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广西双生病毒的分子鉴定

徐幼平  
【摘要】:双生病毒是植物病毒中唯一一类具有孪生颗粒形态的单链环状DNA病毒,已在多种重要经济作物上引起危害。我国已从广东、广西、云南和海南等地的烟草、番茄、南瓜和番木瓜等多种作物上相继发现了多种双生病毒,并对其基因组结构及变异进行了深入研究。双生病毒寄主范围广,变异快。为了明确双生病毒的发生、分布与传播,我们从广西番木瓜、番茄、烟草、一品红、苦苣菜及胜红蓟上采集了32个具有双生病毒典型症状的样品并对病毒进行了分子检测与鉴定。 采集的32个样品用双生病毒的简并引物PA和PB进行了PCR检测,均可扩增到约500bp的片段。克隆后序列测定表明,32个样本均受粉虱传双生病毒侵染,序列比较发现这些病毒分离物至少可分为4种病毒类型。从每种病毒类型中选取代表,共对9个分离物的基因组结构进行了详细研究。 GX-1、GX-2和GX-3为番茄上的分离物,对这三个分离物的全基因组进行了测定,发现其DNA-A全长均为2752个核苷酸(nts),序列比较表明,它们相互之间的相似性为98.9~99.7%,与中国胜红蓟黄脉病毒(Ageratum yellow vein China virus, AYVCNV)的相似性最高,为86.7%,因此GX-1、GX-2和GX-3是Begomovirus的一个新种,将它命名为广西番茄曲叶病毒(Tomato leaf curl Guangxi virus, ToLCGXV)。对GX-1基因组进一步分析发现,ToLCGXV可能由AYVCNV和中国番茄曲叶病毒(Tomato leaf curl China virus, ToLCCNV)及另一未知病毒经过重组产生。DNAβ分子的PCR检测表明,除GX-3外,GX-1和GX-2都伴随有卫星DNA分子,Southern印迹检测发现GX-3确实不伴随DNAβ分子。 GX-4和G121~G128也为番茄上的分离物,对GX-4和G121的全基因组进行了测定,发现分离物GX-4和G121的全序列分别为2738nts和2734nts。GX-4 DNA-A与中国番木瓜曲叶病毒(Papaya leaf curl China virus, PaLCuCNV)具最高相似性,为91.6%。根据双生病毒分类原则,GX-4为PaLCuCNV的一个分离物。而G121 DNA-A与中国番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl China virus, TYLCCNV)的相似性最高,为96.2%。从番茄上分离的这9个样本中其


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