收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

螺旋藻染色体外DNA的克隆及结构与功能研究

曹学成  
【摘要】:本论文以钝顶螺旋藻藻株Sp-H01、Sp-D、Sp-J、Sp-Z、Sp-S、Sp-T、Sp-10等为材料,建立了螺旋藻染色体外DNA(exDNA)提取与纯化的技术方法;研究了exDNA的基本分子特征;通过Southerm杂交分析了各种exDNA之间及exDNA与螺旋藻染色体DNA之间的同源性;克隆并测定了Sp-S两种exDNA的部分序列,进而对它们的一级结构和二级结构,以及开放阅读框(ORF)编码蛋白的结构与功能作了生物信息学分析。结果如下:1 螺旋藻exDNA的高效提取与纯化技术方法的建立 采用多种方法从螺旋藻中提取exDNA,通过比较与分析,建立了一种高效提取螺旋藻exDNA的方法—CTAB-蛋白酶K法。该方法在藻细胞裂解液和第一次DNA沉淀物的溶解中均加入适量的蛋白酶K,再经酚/氯仿/异戊醇等抽提,可有效去除蛋白质和多糖等杂质,使exDNA的质量和提取率均显著提高。利用所建方法对10多株钝顶螺旋藻所作的exDNA提取结果显示:(1)多数藻株只含有一种exDNA,如Sp-H01的exDNA约为0.75kb,Sp-D、Sp-J和Sp-Z等的exDNA约为1.1 kb~1.2 kb;(2)少数藻株含有两种exDNA,如Sp-S含有1.8kb和3.6kb的两种exDNA,依次简称为exDNA-S-S和exDNA-S-L;Sp-T含有1.9kb和3.8 kb两种exDNA,分别简称为exDNA-T-S和exDNA-T-L。同时,针对螺旋藻exDNA的丰度低,难以富集与纯化等问题,本文在比较凝胶冻融过滤法、DNA凝胶回收试剂盒和碱法等方法的基础上,确立以凝胶冻融过滤法回收与纯化exDNA的效果最好,回收率高于90%。2 螺旋藻exDNA的基本分子特征 对exDNA所作的遗传稳定性、分子构型及酶切图谱等研究结果显示:(1)exDNA在螺旋藻生长繁殖过程中保持稳定遗传;(2)通过碱变性或热变性处理,发现变性的螺旋藻exDNA可以迅速复性,经UV照射后电泳条带呈弥散状而不形成新的DNA条带;采用10种限制性内切酶对exDNA进行的酶切表明,exDNA可以部分地为DraI酶切,但未形成酶切带型,说明螺旋藻exDNA可能是一类具有复杂结构的线性DNA分子;(3)2D琼脂糖凝胶电泳分析结果表明,Sp-S和Sp-T各自所含的两种exDNA不是同一种质粒的两种构型,而是两种各自独立的遗传元件。3 螺旋藻基因组DNA的限制性酶酶切分析 对提取螺旋藻基因组DNA的CTAB二次沉淀法进行了改进,通过提高DNA沉淀缓冲


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 严慧如,黄绍华,余迎利;菊糖的提取及纯化[J];天然产物研究与开发;2002年01期
2 王洪新,刘学贤,穆海波,吕晓娟;鸡新城疫卵黄抗体IgY的分离提纯研究[J];中国家禽;2003年19期
3 赵姝华,王富德,张世苹,林凤;提取、纯化植物DNA方法的比较[J];杂粮作物;1998年02期
4 杨娟,吴谋成,张声华;香菇子实体多糖Le-Ⅲ的提取、分离及纯度鉴定[J];食品工业科技;1999年03期
5 任红斌,刘世国,冯元春,张海珠,史明珠,刘文第;加热法人心肌钙蛋白T的提取与纯化[J];新乡医学院学报;1999年02期
6 俞丽君,李永明,陈艳丽,张尔贤;钝顶螺旋藻藻胆蛋白的纯化及其清除氧自由基的作用[J];台湾海峡;1999年02期
7 黄森科;天然红木食用色素的提取与纯化研究[J];漳州师范学院学报(自然科学版);2001年01期
8 井乐刚,张永忠;微生物发酵制备大豆异黄酮的研究进展[J];微生物学通报;2003年02期
9 陈桂信,吕柳新,赖钟雄,潘东明;基因组DNA的提取与纯化[J];江西农业大学学报(自然科学版);2004年03期
10 沈奇;顾龚平;张卫明;吴国荣;;植物绿原酸的研究动态[J];中国野生植物资源;2005年06期
11 傅明辉,佘纲哲,彭达聪;喇叭藻(T.ornataJ.Ag)多糖的分离及纯化[J];生物学杂志;2000年04期
12 何琦,及元乔,丁立生,唐丽珊,付铁军,鄢立新,彭树林,王佳莉;D140大孔吸附树脂银杏黄酮提取纯化性能研究[J];天然产物研究与开发;2001年01期
13 傅冬和,刘爱玲,邓克尼,周铁军,肖姣娣;DM-130树脂对甘草酸的吸附性能及提纯应用研究[J];天然产物研究与开发;2002年01期
14 颜延宁;;鸡冠中透明质酸的提取[J];广西轻工业;2006年05期
15 许会生;赵广荣;张铁军;吴延吉;王文芳;;当归多糖的提取分离研究进展[J];江西科学;2007年01期
16 孙耀中,赵冬梅,毕金河;植物组织DNA的提取及纯化方法的研究[J];河北职业技术师范学院学报;1999年03期
17 李德玲;刘欣;王丽红;沈玉龙;;猪肝中提取纯化动物酯酶的研究[J];食品科学;2007年11期
18 林文銮,黄惠莉,陈少欣;河豚毒素的提取研究[J];华侨大学学报(自然科学版);1999年04期
19 谢俊杰,佘世望,赵利,熊勇华,钟青萍,龙钢;红茶菌抗菌蛋白提取与纯化[J];氨基酸和生物资源;2000年01期
20 马纪,李轶杰,王龙,胡瑞,张富春;阿魏菇多糖的提取、纯化及其组成研究[J];新疆大学学报(自然科学版);2002年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 沈奇;顾龚平;张卫明;吴国荣;;植物绿原酸的研究动态[A];中医药现代化与科技创新高层论坛暨第二届金陵名医论坛论文集[C];2007年
2 徐水祥;周淡宜;徐飞鹤;蒋有水;;甲鱼油中多不饱和脂肪酸的提取与纯化研究[A];浙江省医学科学院建院55周年院庆论文专辑[C];2005年
3 黄亚辉;曾贞;郑红发;黄怀生;;GABA茶中γ-氨基丁酸的TLC测定及提纯研究[A];2008茶学青年科学家论坛论文集[C];2008年
4 王利民;秦贵信;;三种亲和层析体系纯化大豆凝集素的比较研究[A];动物营养与饲料研究——第五届全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2006年
5 黄恩毅;陈伟;杨力;杨恬;;免疫磁珠法纯化大鼠CD34~+毛囊干细胞[A];中国细胞生物学学会第九次会员代表大会暨青年学术大会论文摘要集[C];2007年
6 姜洪峰;钱俊青;;甲壳素废水絮凝物中虾青素提取纯化[A];首届长三角科技论坛——长三角生物医药发展论坛论文集[C];2004年
7 彭黎;梁宋平;;一种新型虎纹毒素的表达纯化及功能探索[A];第八届中国生物毒素学术研讨会论文摘要集[C];2007年
8 黄进;;转基因马铃薯表达体系中人白细胞介素-12的纯化及生物学活性的鉴定[A];第九届西南三省一市生物化学与分子生物学学术交流会论文集[C];2008年
9 英伟;陆文清;龚利敏;;枯草芽孢杆菌MA139抗菌蛋白纯化及其部分特性研究[A];中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十次学术研讨会论文集[C];2008年
10 彭黎;梁宋平;;一种新型虎纹毒素的表达纯化及功能探索[A];第八届中国生物毒素学术研讨会论文摘要[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 曹学成;螺旋藻染色体外DNA的克隆及结构与功能研究[D];浙江大学;2005年
2 李强;放射状土壤杆菌M-503产生物絮凝剂的制备、纯化及应用研究[D];山东大学;2005年
3 徐境羚;马鹿精子膜蛋白纯化与理化性质分析[D];东北林业大学;2007年
4 马翠丽;天花粉蛋白新有效组分的纯化、一级结构及免疫调节和抗肿瘤活性研究[D];吉林大学;2008年
5 王敏炜;碳纳米管的制备及负载非晶态NiB合金的催化性能的研究[D];华南理工大学;2003年
6 陈静;嗜热毛壳菌热稳定糖化酶纯化及其编码基因的克隆与表达[D];山东农业大学;2006年
7 朱洁;乳酸链球菌素耐药菌株的筛选和耐药机理研究[D];浙江大学;2009年
8 于金刚;碳纳米管的化学修饰及对甲磺酸帕珠沙星的缓释研究[D];中南大学;2008年
9 惠明;枯草芽孢杆菌B53的分离鉴定及产聚γ-谷氨酸的研究[D];中国农业大学;2005年
10 胡志明;血管内皮细胞生长因子的制备及其治疗股骨头坏死的实验研究[D];第一军医大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 薛海燕;葡萄皮色素的提取及纯化研究[D];新疆农业大学;2005年
2 韩小龙;从枇杷叶中提取、分离熊果酸的工艺研究[D];西北大学;2005年
3 李建昌;山茱萸总皂苷提取纯化及其体外抗氧化性研究[D];陕西师范大学;2006年
4 乔园园;生姜蛋白酶的纯化及其在红葡萄酒澄清中的应用研究[D];山东农业大学;2009年
5 安媛;翅果油中植物甾醇的提取分离与结构分析[D];中国农业大学;2005年
6 杨新河;苦丁茶皂苷类的提取纯化与检测技术研究[D];湖南农业大学;2005年
7 许秀兰;辣椒碱提取纯化及感官性质研究[D];西南大学;2006年
8 刘磊;海蜇胶原蛋白的提取、纯化及理化性质研究[D];江南大学;2009年
9 叶凯贞;南瓜多糖的提取纯化及其性能研究[D];广东工业大学;2005年
10 颜邦干;香菇多糖的分离纯化及其分子结构改性的研究[D];浙江大学;2006年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 余林;深圳太空农业初具规模[N];市场报;2006年
2 记者胡左;毛乌素发现神奇天然钝顶螺旋藻[N];科技日报;2002年
3 卢隆杰;螺旋藻的养殖技术[N];中国特产报;2006年
4 张强;保健食品领域一匹黑马[N];中国质量报;2008年
5 本报法律组;申请提取住房公积金如何办理?[N];检察日报;2000年
6 本报法律组;什么情况下可以提取住房公积金?[N];检察日报;2000年
7 季英德;吕志国;纯化火车站悄悄改民营 [N];中国商报;2002年
8 张帏 刘井泉;从风险投资“感冒”中提取“抗菌素”[N];经济参考报;2001年
9 记者 黄世钊;北海发展海洋经济推进“一轴两翼”战略[N];法治快报;2007年
10 ;费改税后,村提留如何提取和使用[N];河南科技报;2000年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978