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罗氏沼虾四种神经多肽的体外表达和纯化研究

许华腾  
【摘要】:卵黄蛋白原,是一种特异性存在于无脊椎及低等脊椎卵生动物雌性个体中的蛋白质,是卵黄蛋白的前体。卵黄蛋白是无脊椎及低等脊椎卵生动物成熟的卵母细胞的主要成分,也是其胚胎发育过程中的重要营养来源。基于本研究小组之前获得的三疣梭子蟹卵黄蛋白原cDNA序列,通过Northern blotting对三疣梭子蟹中卵黄蛋白原的表达特征进行了分析。研究表明卵黄蛋白原基因主要在三疣梭子蟹的肝胰腺中表达,而且随着它的不同发育时期,肝胰腺内的表达特征有显著的变化。另外通过RT-PCR检测,发现在卵巢中也有卵黄蛋白原的表达。 在甲壳动物中,卵黄蛋白原形成的调控机制一直是研究的热点之一。甲壳动物高血糖激素(CHH)家族神经激素是甲壳动物特有的多肽类激素。它们主要在眼柄X器官—窦腺复合体合成,包括:甲壳动物高血糖激素(CHH)、蜕皮抑制激素(MIH)和性腺抑制激素(GIH)等。研究表明,这些激素直接或间接地影响着甲壳动物的性腺成熟,综合调控着甲壳动物的成熟、生殖过程。本研究中,根据本实验室获得的CHH家族cDNA序列(CHH、CHH-L属于高血糖激素CHH亚类,Mar-SGP-A、Mar-SGP-B属于MIH/VIH亚类),我们构建pET-32a(+)-CHH、pET-32a(+)-CHH-L、pET-32a(+)-Mar-SGP-A、pET-28a(+)-Mar-SGP-B原核表达质粒,转入E.coliBL2l(DE3),进而完成了罗氏沼虾四个神经多肽CHH、CHH-L、Mar-SGP-A、Mar-SGP-B的诱导表达,并且利用Ni-NTA Agarose完成了四个目的蛋白的分离纯化。尽管如此,三疣梭子蟹中卵黄形成的激素调控机制,尚有待于进一步地体外培养体系的建立和研究。


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