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低温诱导淡水白鲳尾鳍细胞CBT凋亡的研究

俞宏  
【摘要】:淡水白鲳属于喜温性鱼类,水温降至10℃时就出现寒害死亡。本实验室在1997年建立了淡水白鲳尾鳍细胞系CBT,发现该细胞系具有与整体相一致的温度生长特性——10℃胁迫致死,这为探讨喜温性鱼类细胞的寒害机理提供了一个较为理想的研究模型。 本实验以CBT细胞为研究对象,探讨了10℃低温导致淡水白鲳尾鳍细胞系CBT死亡的原因及其可能机制。实验采用CCK—8试剂盒法检测了低温处理前后的细胞存活率;用荧光染料H2DCFDA染色测定细胞内活性氧(ROS)含量的变化;通过亚二倍体峰和Tunel分析检测细胞凋亡,并用琼脂糖凝胶电泳法对死亡细胞的DNA进行了分析;用Hoechst33258染色观察凋亡细胞核形态变化;比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)释放率。实验结果表明,随着CBT细胞受10℃低温作用时间延长,细胞存活率显著下降,细胞内ROS含量和LDH释放率显著增加(P0.01)。低温处理3d的CBT细胞经流式细胞仪检测出现亚二倍体峰,凋亡率为13%。再经32℃复温12h后,琼脂糖凝胶电泳显示DNA凋亡梯带;Tunel检测,低温处理3d、4d和5d的CBT细胞分别有23.49%,27.72%和35.10%发生凋亡。低温处理5d的CBT细胞核分裂成多个小核,呈现出典型的凋亡小体的形状。维生素E浓度梯度显示,维生素E对低温处理的CBT细胞有明显的保护作用,能明显改善细胞活力和LDH的释放现象,且在50μM至1000μM浓度范围内,该保护作用呈剂量依赖性。由此认为,10℃低温能诱导CBT细胞凋亡。ROS参与了10℃低温致CBT细胞损伤及凋亡过程。


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