收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

结直肠肿瘤中差异表达蛋白的研究

王英红  
【摘要】: 结直肠癌是常见的严重危害人类健康的恶性肿瘤之一,在西方发达国家居民恶性肿瘤死因顺位中位居第二。随着我国居民生活水平的提高和饮食结构的改变,结直肠癌的发病率和死亡率呈现逐年上升的趋势。因此对结直肠癌发病机制进行研究具有十分重要的意义。 结直肠癌的发生是多阶段、多步骤、多基因作用的长期过程。其中结直肠癌发生和发展的经典模型是Vogelstein提出的结直肠腺瘤到结直肠癌顺序发展模型。如果在结直肠腺瘤进一步发展之前,就能够将其诊断出并且摘除,结直肠癌的发病将会得到有效的控制。因此,结直肠腺瘤发生发展分子机制的研究对结直肠肿瘤的防治具有重要的意义。 众所周知,蛋白质是生命活动的载体和功能执行者,基因组改变所致的影响必然通过蛋白质组的改变来实现。因此蛋白质是疾病预防、诊断、治疗的药物和技术的直接靶标库。可以认为人类蛋白质组是新世纪最大的战略资源之一。如果能够找到在结直肠腺瘤和癌中特异表达的蛋白,将对结直肠肿瘤的预防,诊断和治疗起到决定性的推动作用。 蛋白质组学相关技术是用来筛选特异蛋白标志物的一个有效手段。蛋白质组(proteome)的概念由Wilkins和Williams于1994年首先提出,它源于蛋白质(Protein)与基因组(Genome)两个词的组合,指由一个基因组(genOME)或一个细胞、组织表达的所有蛋白质(PROTein)。蛋白质组学(proteomics)是以蛋白质组为研究对象,阐释所有蛋白质在不同时空的表达谱和功能谱,全景式地揭示生命活动的本质,特别是人体健康与疾病的机制。本研究利用双向凝胶电泳结合质谱分析的方法,对配对的正常结直肠粘膜、腺瘤和癌组织的蛋白质表达图谱进行了分析。 我们收集了在浙江大学医学院附属医院手术并经病理学诊断为结直肠癌的10例病例组织。总蛋白提取并经蛋白纯化试剂盒纯化后,采用24cm,pH5-8的IPG胶条进行第一向等电聚焦,12%的SDS-PAGE进行第二向电泳分离,凝胶用硝酸银染色,并用PDQuest软件对双向图谱进行数据采集和图像分析,建立正常粘膜、腺瘤和癌组织的蛋白质组差异表达图谱。我们发现在至少5个病例的组织中均有相同变化,并且差异大于5倍的差异点共有32个。与正常组织相比,在腺瘤组织中表达上调大于5倍的蛋白质点有17个(P<0.05),下调大于5倍的蛋白质点有11个(P<0.05),与癌组织相比表达下调大于5倍的蛋白质点有4个(P<0.05)。 用自动凝胶采样仪对差异表达的蛋白质斑点进行自动采集,然后用特异性胰酶消化蛋白质,酶解后的肽段采用基质辅助激光吸收/离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF)或LCQ Deca XP型高效液相色谱-质谱联用仪进行质谱分析。利用质谱分析得到的原始数据,MALDI-TOF通过Mascot软件搜索,高效液相色谱-质谱联用仪通过SEQUEST搜索SWISS-PROT的人非冗余蛋白质序列数据库。在32个差异表达的蛋白质点中,27个蛋白点通过质谱分析和数据库的检索得到了初步的鉴定。 为了获取更多结直肠肿瘤中差异表达蛋白的信息,我们搜集了截止到2006年4月份发表的所有使用双向凝胶电泳方法寻找结直肠肿瘤中差异表达蛋白的文章,并对其中的数据进行了分析整理。加上本实验所找到的差异点,目前使用双向凝胶电泳技术在结直肠肿瘤中共找到213个差异表达的蛋白质。其中有44个(21%)蛋白在两篇以上文章中被报道。这些多次报道的蛋白中,又有些蛋白同属于一个蛋白家族。有7个蛋白家族的亚单位被多次报道,即肌动蛋白、annexin蛋白、ATP合酶、伸长蛋白、热应激蛋白、血色素和角蛋白。 为进一步验证双向凝胶电泳结果的准确性,我们从本研究结果中挑出2个从未在结直肠肿瘤中报道过的新蛋白,以及2个被其他双向电泳研究报道但结果不一致且未经过验证的新蛋白进行western-blot验证。结果发现本研究中发现的两个新蛋白的验证结果与双向结果一致。其中mimecan在正常结直肠组织中强表达,却在腺瘤和癌组织中不表达;TXNDC5(Thioredoxin domain-containing protein 5)在正常,腺瘤和癌组织中都表达,腺瘤和癌组织的表达量显著高于正常(P<0.05);RhoGDI(Rho GDP-dissociation inhibitor 1)和Cyclophilin A(Peptidyl-Prolyl Cis-Trans Isomerase A)在两份研究中报道差异表达,却都是一个报道在结直肠癌中高表达,一个报道低表达。经western-blot验证,RhoGDI在结直肠癌中高表达(P<0.05),而Cyclophilin A在正常和结直肠癌组织中表达没有统计意义的差异(P>0.05)。 另外,我们将构建的mimecan真核表达载体转入结直肠肿瘤SW480细胞系中,观察其对细胞形态和生长的影响。结果发现,转染后细胞形态没有明显的改变,细胞的生长却受到明显的抑制,大部分细胞被阻滞在G1期,凋亡的细胞数目显著增加。 根据以上结果,我们得出结论: 1.运用双向凝胶电泳结合质谱分析的方法筛选到的27个在结直肠腺瘤中差异表达的蛋白质可能与结直肠癌的发生、发展有关。 2.与正常组织相比,mimecan,RhoGDI在结直肠肿瘤中表达下调,而TXNDC5的表达上调。这三个新蛋白与结直肠肿瘤的发生发展有关,它们在结直肠肿瘤中的作用有待于进一步的研究。 3.Mimecan真核表达载体转入结直肠肿瘤细胞系SW480后,明显抑制细胞的生长,将细胞阻滞在G1期,并且促进细胞凋亡,推测mimecan可能是一个抑癌基因。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 宋奇思;;综合治疗青年型结直肠癌[J];家庭中医药;2011年07期
2 房静远;戈之铮;高琴琰;王震华;胡靥;;第18届欧洲消化疾病周会议重点介绍[J];胃肠病学;2011年02期
3 刁兴隆;刘丹;金秀琴;;结直肠癌的早期诊断[J];中国农村卫生事业管理;2011年07期
4 李连勇;屈昌民;梁淑文;;微小核糖核酸与结直肠癌的关系研究[J];首都医药;2011年16期
5 胡跃;张苏展;;结直肠癌诊治指南热点解读[J];中国实用外科杂志;2011年06期
6 P.J.Pickhardt;C.Hassan;S.Halligan;R.Marmo;丁静;;CT结肠成像和结肠镜检测结直肠癌的系统回顾与荟萃分析[J];国际医学放射学杂志;2011年04期
7 ;中美共建结直肠癌诊疗国际合作研究所[J];生物医学工程学进展;2011年02期
8 ;上海中山医院预防结直肠癌肝转移成果显著[J];微创医学;2011年05期
9 潘慧娟;周胜杰;;联合检测CEA、CA1999、CA125对结直肠癌的诊断价值[J];医学信息(中旬刊);2011年07期
10 ;补充维生素D有助预防结直肠癌[J];中国社区医师;2011年35期
11 丛进春;沈名扬;冯勇;王俊江;;血清脂联素在结直肠癌中表达的研究[J];中国实用外科杂志;2011年08期
12 肖秀英;于宝华;;PI3K/Akt信号传导通路及其在结直肠癌中的研究进展[J];临床肿瘤学杂志;2011年06期
13 赵娜;;对结直肠癌分期系统的挑战:结直肠癌中转移性淋巴结数目和直肠系膜受累范围的临床意义[J];中国普外基础与临床杂志;2011年07期
14 钱垠;方明治;黄欣;;论湿邪在结直肠癌发病中的作用和地位[J];中国中医药信息杂志;2011年07期
15 金晓燕;雷虹;胡美华;;结直肠癌患者术后化疗期间癌因性疲乏与疾病不确定感的相关性分析[J];护理管理杂志;2011年01期
16 程章林;王国锋;;老年结直肠癌并发急性穿孔5例诊治分析[J];中华实用诊断与治疗杂志;2011年07期
17 姜可伟;刘岩;叶颖江;尹慕军;王有利;谢启伟;杨晓东;曲军;梁斌;王杉;;淋巴结转移度与结直肠癌预后关系研究[J];中国实用外科杂志;2011年06期
18 程跃茹;刘涛;杨正荣;;结直肠癌并发急性肠梗阻的外科治疗[J];安徽医药;2011年10期
19 李旭;黄华;;微小RNA与结直肠癌关系的研究进展[J];国际消化病杂志;2011年03期
20 郭佳凯;赵杨;苏琪;;术中放疗在结直肠癌治疗中的应用现状[J];医学综述;2011年16期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 徐芳英;方义湖;黄琼;来茂德;;微乳头结构和肿瘤芽在结直肠癌发展和预后中的意义[A];中华医学会病理学分会2010年学术年会日程及论文汇编[C];2010年
2 黄彦钦;蔡善荣;张苏展;李其龙;马新源;何玉芳;周晓红;郑树;;中国结直肠癌人群筛查方案的应用价值初探[A];全国肿瘤流行病学和肿瘤病因学学术会议论文集[C];2011年
3 王建平;丁智勇;王颖;;腹腔镜治疗结直肠癌42例体会[A];2011年浙江省肛肠外科学术大会暨结直肠肛门疾病诊治新进展学习班论文汇编[C];2011年
4 潘益峰;张明五;姜侠;张善春;金明娟;马新源;李其龙;余运贤;陈坤;;Toll样受体4基因多态性与结直肠癌易感性的相关性研究[A];全国肿瘤流行病学和肿瘤病因学学术会议论文集[C];2011年
5 王贵玉;陈英罡;刘正;郁雷;汤庆超;马天翼;王锡山;;结直肠癌的临床分期更新意义及相关分子标记物[A];中华医学会肿瘤学分会第七届全国中青年肿瘤学术会议——中华医学会肿瘤学分会“中华肿瘤 明日之星”大型评选活动暨中青年委员全国遴选论文汇编[C];2011年
6 张琪;张宇;裘华森;叶晓峥;魏星;;极高龄结直肠癌患者围手术期处理体会[A];第七届全国中西医结合围手术期医学专题研讨会全国中西医结合围手术期快速康复新进展培训班广东省中医药学会外科学会会议论文集[C];2012年
7 李晓东;殷咏梅;;双调蛋白与表皮调节素在结直肠癌患者血清与肿瘤组织中的表达及两者与临床病理因素的相关性[A];2010’全国肿瘤分子标志及应用学术研讨会暨第五届中国中青年肿瘤专家论坛论文汇编[C];2010年
8 周雷;介建政;宋新;唐弢;王文跃;;结直肠癌肝转移的手术治疗[A];中华医学会肿瘤学分会第七届全国中青年肿瘤学术会议——中华医学会肿瘤学分会“中华肿瘤 明日之星”大型评选活动暨中青年委员全国遴选论文汇编[C];2011年
9 徐玉清;;结直肠癌肝转移治疗原则和进展[A];第九届全国肿瘤转移学术大会暨2011年黑龙江省医学会肿瘤学年会报告集[C];2011年
10 陈嘉;;结直肠癌个体化靶向治疗新理念[A];2010年江苏省抗癌协会第二届传统医学专业委员会学术研讨会资料汇编[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 韩黔峰;sFRP4、β-catenin、Cox-2、ER-β、pS2、Keratin 19蛋白和MSI基因在结直肠癌细胞中的表达[D];四川大学;2005年
2 杨桓;主要乙醇代谢酶编码基因及JWA基因单核苷酸多态性与结直肠癌遗传易感性的关联研究[D];第三军医大学;2009年
3 张伟民;基于GWAS的候选基因遗传变异与结直肠癌遗传易感性的研究[D];浙江大学;2011年
4 李天煜;结直肠癌细胞系中表观遗传修饰与p33ING1b基因转录抑制的关系[D];广西医科大学;2010年
5 张继红;Ang/Tie-2在结直肠癌中的表达及其分子机制的研究[D];吉林大学;2011年
6 刘丽;TGFβ信号网络基因遗传变异与结直肠癌发生、发展风险的分子流行病学研究[D];华中科技大学;2011年
7 陈坤;结直肠癌环境与宿主因素的流行病学研究[D];浙江大学;2003年
8 孔斌;水通道蛋白-1(AQP-1)在结直肠癌组织中的表达及其与肿瘤微血管形成的关系研究[D];河北医科大学;2010年
9 解方为;异常甲基化调控结直肠癌细胞Irinotecan代谢酶相关基因的表达及其意义[D];第三军医大学;2009年
10 刘冰;环境因素、Caspase凋亡通路相关基因多态性与结直肠癌风险的关联研究[D];浙江大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王洪敏;结直肠癌肝转移的临床因素分析[D];吉林大学;2010年
2 郭晓亮;REIC/Dkk-3基因在结直肠癌中的表达及其意义[D];中国医科大学;2010年
3 江伟;FOLFIRI方案治疗老年结直肠癌安全性临床观察[D];安徽医科大学;2010年
4 陈尚忠;SOX2在结直肠癌中的表达及意义的初步研究[D];中南大学;2010年
5 石曦雯;核基质结合因子SAFB在结直肠癌发生发展中的作用及其分子机制[D];南方医科大学;2010年
6 龙结根;Testin基因在结直肠癌组织中的表达及临床意义[D];重庆医科大学;2010年
7 钱跃军;AP-4在结直肠癌局部淋巴结中的表达与结直肠癌复发相关性的研究[D];广州医学院;2010年
8 廖存;血清CEA阴性结直肠癌患者蛋白组学比较研究[D];广西医科大学;2011年
9 刘金星;MMP-9基因多态性与结直肠癌相关性研究[D];泸州医学院;2011年
10 张丽莉;hMLH1-93G/A基因多态性与结直肠癌的相关性研究[D];南京大学;2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 朱征瑜;中国计算机学会颁发2008优秀博士学位论文奖[N];科技日报;2009年
2 康艾;中国抗癌协会专家云集杭州探讨结直肠癌临床最新进展[N];大众科技报;2010年
3 记者 朱建华 实习生 周恋芹 张伟峰;武汉7篇博士学位论文入围“全国优秀”[N];长江日报;2010年
4 本报记者 罗朝淑;别让结直肠癌治疗走向“不规”路[N];科技日报;2010年
5 复旦大学肿瘤医院大肠癌外科主任 蔡三军;结直肠癌 治疗理念有更新[N];健康报;2011年
6 记者 宋晓晖;我省博士学位论文公示平台开通[N];济南日报;2011年
7 本报记者 王握文 通讯员 周珞晶;11篇全国优秀博士学位论文的背后[N];解放军报;2008年
8 记者 田雅婷;结直肠癌有了诊疗规范[N];光明日报;2010年
9 记者 李天舒 通讯员 高健;根治术可提高结直肠癌患者生存率[N];健康报;2010年
10 记者 马艳红;卫生部首次发布《结直肠癌诊疗规范》(2010年版)[N];中国医药报;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978