收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

CEL I的分离及水稻TILLING突变库的创建

孙洁  
【摘要】: TILLING是一种新的反向遗传学研究技术,它将特异性碱基错配识别酶和PCR技术结合起来对诱发突变或自然变异进行检测。该技术不仅可应用于模式植物,而且可应用于重要的农作物,在水稻中具有广阔的应用前景。CELⅠ是TILLING检测点突变所需要的一个关键酶,而突变库则是开展TILLING研究必不可少的。本文首次分析了几种不同因素对芹菜CELⅠ核酸酶提取量的影响,并建立了籼稻品种9311的突变库,为进一步开展水稻TILLING研究奠定了基础。 分析了品种、器官、发育时期和提取缓冲液pH值等因素对芹菜CELⅠ提取量的影响。不同芹菜品种和器官的CELⅠ提取量具有明显的差异,在所用的3个不同品种中,泰国芹的CELⅠ核酸酶提取量最高(52.4μg/100g),文图拉次之(42.1μg/100g),雪白芹则最低(30.9μg/100g);而在同一品种的3个不同器官中,则表现为叶>茎>根,不同品种间和不同器官间的CELⅠ提取量差异分别达到了显著和极显著水平。以上海黄心芹为材料比较了发育时期对提取量的影响,生殖生长期植株的CELⅠ核酸酶提取量明显高于营养生长期。此外,缓冲液pH值对CELⅠ提取量也有明显的影响,在pH 7.7的缓冲液提取环境下,CELⅠ核酸酶提取量明显高于pn 5.0和pH 9.0的环境。该研究结果有助于建立高效的CELⅠ提取方法。 对CELⅠ酶的粗提物的活性检测进行了研究。错配切割实验表明,CELⅠ酶能有效地在eGFP基因中错配位点进行切割,并可以通过琼脂糖凝胶电泳获得直观的检测结果,从而可以用于TILLING分析。该研究结果对于建立简易而又有效的点突变检测方法具有重要的意义。 用化学诱变剂EMS对籼稻品种9311进行了诱变处理,构建了突变体库。在M_2代对各种突变性状进行了观察和记载。在887个家系中,共发现了1683个突变株,分布于696个突变家系中。EMS诱发突变类型丰富,突变性状涉及到叶片、茎杆、穗部、生育期、生理性状等多种类型。已筛选到EMS诱变产生的突变体1472份,其中有些突变体是以往同类研究中所没有报道的,如短剑叶突变体和有色米突变体。对矮杆突变体的各节间长度和有色米突变体的生物学性状(叶长、叶宽等)、主要农艺性状和主要品质性状做了进一步的分析。此外,还采用改良的CTAB法提取了M_2群体的各单株DNA,并按8个1组构建了约1000个DNA池。新构建的突变体库为开展水稻TILLING探究奠定了基础。 本文的研究结果对进一步利用TILLING技术进行水稻功能基因组学研究和品种改良具有重要的意义。


知网文化
【相似文献】
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王云贵;韦菊英;徐伟来;王冬梅;陈志妹;孟海涛;金洁;;伊马替尼耐药的慢性髓系白血病患者ABL激酶区点突变检测及其临床意义[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年
2 朱德斌;邢达;;电化学发光PCR在基因点突变检测中的应用研究[A];第十次中国生物物理学术大会论文摘要集[C];2006年
3 易萍;李力;俞丽丽;郑英如;郑秀惠;周元国;陈竹钦;;Gap-LCR结合荧光定量PCR技术在低丰度DNA点突变检测中的应用研究[A];中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编(2004-2008)[C];2008年
4 张苏江;李建勇;施静艺;史占中;顾柏炜;白雪涛;朱勇梅;沈志祥;;急性早幼粒细胞性白血病患者中FLT3突变的研究及其临床意义[A];第10届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2005年
5 梁国威;徐旭;王芳;赵媛;王树琴;王新华;;等位基因特异-荧光定量PCR检测Ⅱ型糖尿病肾病患者胱硫醚-β-合成酶基因T833C、G919A点突变研究[A];第二十二届航天医学年会暨第五届航天护理年会论文汇编(下册)[C];2006年
6 张苏江;李建勇;施静艺;史占中;顾柏炜;白雪涛;朱勇梅;沈志祥;;急性早幼粒细胞性白血病患者中FLT3突变的研究[A];2005年华东六省一市血液病学学术会议暨浙江省血液病学学术年会论文汇编[C];2005年
7 易萍;李力;俞丽丽;郭建新;郑英如;周元国;陈竹钦;;PCR/LDR结合纳米金新型通用型芯片技术在低丰度DNA点突变检测中的可行性研究[A];第八次全国医学遗传学学术会议(中华医学会2009年医学遗传学年会)论文摘要汇编[C];2009年
8 刘运洁;牛俊杰;郝洁;王玛瑞;;JAK2V617F点突变在骨髓增殖性疾病中的检测意义[A];第十一届山西省血液病学术年会暨国家级及山西省继续医学教育学习班资料汇编[C];2010年
9 郑菊芬;黄翼然;向祖琼;韩银发;陈斌;王鸿祥;胡凯;王益鑫;;辅助生殖技术时代梗阻性无精子症规范化诊治的研究[A];第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2008年
10 李伟达;王季石;;特发性骨髓纤维化患者JAK2V617F突变和临床相关性研究[A];第11次中国实验血液学会议论文汇编[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前3条
1 孟祥贤;核酸探针的设计及其在疾病检测和酶学研究中的应用[D];湖南大学;2007年
2 唐景峰;乙肝病毒耐药及致癌突变的高灵敏检测新技术研究[D];武汉大学;2011年
3 姜立刚;中国北方一帕金森病大家系临床特征及基因突变研究[D];吉林大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 孙洁;CEL I的分离及水稻TILLING突变库的创建[D];浙江大学;2007年
2 欧阳昭;慢性粒细胞白血病伊马替尼治疗中耐药监测的研究[D];南方医科大学;2008年
3 何丽芳;基于分子探针的肿瘤细胞p53 mRNA定量检测及点突变检测研究[D];湖南大学;2006年
4 柴欣;玉米TILLING突变库的构建及高直链淀粉基因ae的筛选[D];吉林大学;2009年
5 欧展辉;HRM分析检测单基因遗传病点突变及β-地中海贫血的临床检测[D];广州医学院;2011年
6 郑岚;骨髓增殖性肿瘤JAK2基因V617F点突变的检测及临床意义[D];吉林大学;2010年
7 曾健;脊肌萎缩症的分子诊断新方法研究[D];第二军医大学;2008年
8 李春楠;转Bt基因水稻根际微生物的遗传多样性分析[D];浙江大学;2011年
9 景伟芳;白念珠菌药物敏感性试验及氟康唑相关耐药基因点突变的研究[D];天津医科大学;2011年
10 潘娜;空间环境诱发小麦突变体的TILLING分析[D];中国农业科学院;2011年
中国重要报纸全文数据库 前2条
1 记者 黄每裕;我国药物基因组学研究方兴未艾[N];中国医药报;2001年
2 记者 黄每裕;药物基因组学崭露头角[N];健康报;2000年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978