收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

蝶蛹金小蜂Pteromalus puparum毒腺cDNA文库抗菌肽基因筛选及表达

吴珏婧  
【摘要】: 昆虫抗菌肽是昆虫对入侵病原微生物免疫应答反映的效应物,当受到微生物侵染时,其脂肪体和血细胞等中会产生一类小分子物质,并迅速释放到血淋巴中抵抗微生物入侵。它们大多是阳离子肽,分子量小,有广泛的杀菌谱,对细菌等病原菌、甚至肿瘤细胞和病毒也有抑杀作用,有望发展成为新一代肽类抗生素。目前,在鳞翅目、双翅目、鞘翅目、半翅目、膜翅目和等翅目中发现200多种昆虫抗菌肽,而金小蜂体内抗菌物质的研究几近空白。本文以蝶蛹金小蜂毒腺为材料,构建了cDNA文库,对抗菌肽基因进行筛选,克隆到了新型抗菌肽基因,并将其在不同原核表达系统中表达,初步测定其抑菌活性。结果如下: 1.以蝶蛹金小蜂Ptermalus puparum毒腺为材料,构建了毒腺cDNA文库。通过X-gal显色原理测定蓝白斑数量,文库的重组率为97.6%。对原始文库进行滴度检测,结果为8.95×10~4pfu/ml,扩增后的滴度为3.1×10~7pfu/ml。对随机挑选的噬菌斑进行PCR扩增,1%琼脂糖凝胶电泳下显示外源插入cDNA片段大小在0.3~1.6kb之间。文库质量鉴定结果表明,此文库具有较好的库容量、较高的重组率及较大的插入片段。 2.采用基于cDNA表达文库的昆虫源抗菌肽基因的高效克隆筛选技术。对上述文库大批量的筛选和重复涂板验证后,得到3个有一定抑菌效果的阳性克隆。对其进行核苷酸测序,得到的核苷酸序列用BLASTn软件在GenBank非冗余核苷酸数据库和AMP数据库进行比对,没有发现同源性很高的序列,推断所得克隆是新型抗菌肽基因。 3.将含信号肽序列的PP2a和不含信号肽的PP2b基因在两种大肠杆菌表达系统pET28a/BL21和pGEX-4T-2/BL21中进行表达。在pET28a/BL21系统中,获得了高效表达的融合蛋白His-PP2a;在pGEX-4T-2/BL21系统中,获得了高效表达的融合蛋白GST-PP2b和主要以包涵体形式存在的GST-PP2a。并用抗His抗体和抗GST抗体的Western印迹分析证实了上述融合蛋白的表达。对这些蛋白粗提液进行初步抑菌活性测定,均具有一定抑菌作用,尤其以GST-PP2b抑菌效果最好。


知网文化
【相似文献】
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 夏诗洋;李保平;孟玲;;蝶蛹金小蜂体型大小对交配行为的影响[A];公共植保与绿色防控[C];2010年
2 洪健;徐颖;;蝶蛹金小蜂成虫超微形态的SEM观察[A];走向21世纪的中国昆虫学——中国昆虫学会2000年学术年会论文集[C];2000年
3 杨章民;王喆之;侯彬;李恩民;王绪敏;刘贵明;;中介蝮毒腺cDNA文库的构建及初步分析[A];第八届中国生物毒素学术研讨会论文摘要集[C];2007年
4 杨章民;王喆之;侯彬;李恩民;王绪敏;刘贵明;;中介蝮毒腺cDNA文库的构建及初步分析[A];第八届中国生物毒素学术研讨会论文摘要[C];2007年
5 蓝海;李金荣;黄晓军;陈远辉;吴卯斌;;后毒牙类毒蛇[A];第八届中国生物毒素学术研讨会论文摘要[C];2007年
6 蓝海;李金荣;黄晓军;陈远辉;吴卯斌;;后毒牙类毒蛇[A];第八届中国生物毒素学术研讨会论文摘要集[C];2007年
7 朱晓鹏;吴勇;陈心;王蕊;长孙东亭;罗素兰;;海南产芋螺粗毒的提取和纯化[A];第九届中国生物毒素学术研讨会论文摘要[C];2009年
8 唐兴;梁宋平;;海南捕鸟蛛毒腺cDNA文库的构建[A];第八届中国生物毒素学术研讨会论文摘要集[C];2007年
9 唐兴;梁宋平;;海南捕鸟蛛毒腺cDNA文库的构建[A];第八届中国生物毒素学术研讨会论文摘要[C];2007年
10 洪健;何黎平;;寄生蜂触角的扫描电镜样品制备技术[A];第三届全国扫描电子显微学会议论文集[C];2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张忠;蝶蛹金小蜂和丽蝇蛹集金小蜂毒液的生化特性与生理功能[D];浙江大学;2005年
2 董胜张;蝶蛹金小蜂卵黄发生与卵子发生的生理与分子基础[D];浙江大学;2007年
3 张兵;基于ESTs的蛇毒腺和家猪脑组织基因表达研究以及噬菌体EH3-23P1全基因组序列分析[D];浙江大学;2006年
4 慎小晶;蝶蛹金小蜂cDNA文库抗菌肽基因筛选及表达研究[D];浙江大学;2010年
5 朱家颖;蝶蛹金小蜂毒液分子特性及其调控寄主分子机理的研究[D];浙江大学;2009年
6 王欢;蝶蛹金小蜂热激蛋白及其体内共生菌Wolbachia分子分型的研究[D];浙江大学;2009年
7 吴玛莉;蝶蛹金小蜂毒液的生理功能及活性成分分离纯化的研究[D];浙江大学;2008年
8 吕慧平;蝶蛹金小锋卵巢发育和卵黄发生的影响因子及其作用[D];浙江大学;2002年
9 李江红;中华蜜蜂(Apis cerana)毒腺cDNA文库的构建及主要毒蛋白基因表达调控研究[D];浙江大学;2005年
10 张倩倩;蝶蛹金小蜂寄生对菜粉蝶蛹细胞免疫与生理代谢的影响[D];浙江大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 吴珏婧;蝶蛹金小蜂Pteromalus puparum毒腺cDNA文库抗菌肽基因筛选及表达[D];浙江大学;2008年
2 赵耀儒;墨胸胡蜂毒腺基因cDNA文库的构建[D];武汉大学;2004年
3 张巧利;中华蜜蜂(Apis cerana)毒腺cDNA文库构建和表达序列标签(EST)分析[D];山东农业大学;2006年
4 王欢;2种金小蜂体内Wolbachia的wsp基因克隆与表达研究[D];西南大学;2006年
5 刘红江;中介蝮(Gloydius intermedius)毒腺的显微和超微结构观察[D];陕西师范大学;2007年
6 潘健;容性内寄生蜂——菜蛾盘绒茧蜂毒腺构造及其毒液对寄主调节机理的研究[D];浙江大学;2003年
7 张晓燕;高温对几种菜田昆虫乙酰胆碱酯酶及解毒酶系活性影响的研究[D];福建农林大学;2010年
8 浦升磊;意大利蜜蜂蜂毒明肽相关基因cDNA克隆及表达研究[D];吉林大学;2008年
9 李如美;菜田几种昆虫细胞色素P450含量变化的研究[D];福建农林大学;2009年
10 李滨;两种蜘蛛的毒素基因克隆和表达[D];中南大学;2012年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 吴红娟;蛇肉可吃,药用为何有毒?[N];中国中医药报;2006年
2 陈勇;爬行动物“进化家族树”可能根据基因分析改写[N];新华每日电讯;2005年
3 李小光;毒你没商量 危险的海洋动物[N];北京科技报;2003年
4 罗学宏;生态旅游防动物咬伤[N];大众卫生报;2006年
5 徐栋华卞玮婷;蝎子蜇伤的处理办法[N];家庭医生报;2007年
6 曹春水;蜂类螫伤急救处理[N];农村医药报(汉);2008年
7 杜一平;毒虫咬伤急救法[N];卫生与生活报;2007年
8 ;蝎毒的提取[N];中国畜牧兽医报;2007年
9 长岭 青林 文华;旅行 别让动物蜇伤你的心情[N];国际商报;2004年
10 张小军;征服埃博拉曙光乍现[N];南方周末;2003年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978