收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

西地那非逆转高肺血流肺高压大鼠肺血管重构和Kv1.5mRNA表达的机制

胡蕾  
【摘要】: 【目的】肺动脉高压(PAH)是一种严重的慢性疾病,是左向右分流型先天性心脏病常见的并发症,严重影响先天性心脏病外科矫治手术时机、手术成活率及长期生活质量。由于引起肺动脉高压因素(如机械牵张、剪切力、缺氧、血管活性物质、生长因子等)的持续存在,肺动脉高压发生的过程中,肺血管发生结构改变—肺血管重构。PAH的病理改变有肺血管收缩、重构和右心室肥厚等。此外,毛细血管前动脉中膜增厚、小动脉机化、以及无平滑肌血管出现平滑肌是肺动脉高压的重要特征。 近年来,发现钾通道的表达和活性与肺动脉高压和肺血管结构重建的形成关系密切。肺动脉高压的形成主要有两个方面:肺血管收缩和血管平滑肌重构。而钾通道在这两个环节中均发挥关键作用。研究表明,钾通道的功能不仅与肺血管收缩密切相关,而且钾通道功能下降、膜持续去极化、细胞浆内Ca~(2+)([Ca~(2+)]cyt)上升导致细胞增生。当钾通道关闭或活性下降时,细胞内面电位就变正,细胞膜去极化,而钙通道开放受肺血管平滑肌细胞(PASMC)的膜电位控制,当去极化到一定程度时,L-钙通道开放,Ca~(2+)内流,同时三磷酸肌醇(IP3)也被激活,肌浆网释放Ca~(2+),[Ca~(2+)]cyt浓度增加,激活肌动蛋白-肌球蛋白收缩装置,平滑肌收缩。反之,发生相反变化。另有研究证实当钾通道功能降低时细胞凋亡受到抑制,导致肺血管重构。 肺动脉平滑肌细胞存在多种钾通道:(1)电压门控钾通道(Kv);(2)Ca~(2+)激活性钾通道(Kca);(3)ATP敏感性钾通道(K_(ATP));(4)内向整流性钾通道(K_(IR));(5)双孔区钾通道(Kt);(6)PH敏感的钾通道(TASK);目前以前三种钾通道在PAH中作用的研究较多。在PASMC,细胞膜静息电位(Em)值主要由钾通道决定,而且经Kv通道外向K~+电流是Em的主要成分,尤以Kv1.5和Kv2.1作用为大。Kv通道主要分布在小的阻力血管上,由α、β亚基构成。α亚基形成孔区,编码它的基因有9种,Kv1~Kv9,每一个基因型又有若干亚型,如Kv1.1~Kv1.6。通道的β亚基是调节亚基,除此之外还能作为抑制剂关闭通道。 肺动脉高压治疗仍然是一个难题。如何干预和调控钾通道的功能已成为当今预防和治疗肺动脉高压的热门课题。西地那非(Sildenafil)为新型选择性磷酸二酯酶ⅴ(PDE-5)抑制剂,PDE-5抑制剂可选择性作用于肺血管,起到舒张血管、降低肺动脉高压的作用,但其对逆转高肺血流肺高压肺血管重构及PASMCs的钾通道活性等的作用机制尚不明了。本研究通过建立大鼠高肺血流肺动脉高压模型,观察高肺血流肺动脉高压形成、肺血管结构重建和肺血管Kv1.5mRNA表达变化,探讨长期口服西地那非对大鼠高肺血流肺动脉高压及肺血管重构的影响,并探讨其对高肺血流肺动脉高压大鼠肺血管Kv1.5mRNA表达的作用机制,为高肺血流肺动脉高压的靶向治疗提供理论依据。 【方法】27只雄性SD大鼠,体重200-250g,随机分为对照组(n=9)、分流组(n=9)、分流+西地那非组(n=9)。分流组和分流+西地那非组大鼠腹腔内注射0.25%戊巴比妥钠(40mg/kg)麻醉后,取腹正中切口,暴露腹主动脉和下腔静脉,以腹主动脉的左肾动脉起始部至其末端段的下2/3处之左侧壁为穿刺点,以穿刺点为中心,用9~0线在腹主动脉侧壁做一直径约2mm荷包,用12号针头在荷包内以45°角穿透腹主动脉壁进入相邻的下腔静脉内,撤出针头,再将荷包扎紧。观察到下腔静脉增粗、颜色由暗变红或血流有波动,则证实分流存在。缝合腹壁,腹腔注射青霉素针预防感染。对照组大鼠仅单纯开腹,暴露腹主动脉和下腔静脉,不作分流手术。自术后第2天起,分流+西地那非组大鼠每天灌胃枸橼酸西地那非10mg/kg·d,对照组和分流组大鼠每天灌胃相同体积的生理盐水,3组大鼠的常规饲养与饮食条件相同。自术后饲养11周。 11周后,以右心导管法测定肺动脉平均压(mPAP)。测压完毕,打开大鼠胸腔,剪下心脏,剪开心室,冷生理盐水洗净血液,滤纸吸干。沿室间沟将右室游离壁完整剪下后称出右室游离壁重量(RV),并称出(左室壁+室间隔)重量(LV+S)。右室肥厚程度以右室重量/(左室+室间隔)重量比((RV/(LV+S))表示。取下大鼠的左肺固定、染色,以备病理切片检查用。取下大鼠的右肺,用清洁锡纸包裹后放入液氮中速冻保存,以备提取mRNA用。 取各组大鼠左侧肺叶,常规制备石蜡切片。以Hart's改良法染色弹力纤维,Van Gieson复染。光镜下观察各组肺血管结构。将15 um<外径≤50 um定义为肺小型血管,50 um<外径≤150um定义为肺中型血管。应用CMIAS图像处理与分析系统计算肺中、小血管中肌型动脉的相对中膜厚度(relative medialthickness,RMT)即:每只大鼠测量10-20个肺中、小肌型动脉的RMT,然后求其均值作为该大鼠的RMT值。 称取100mg新鲜冷冻保存肺组织迅速转移到在液氮中研磨成粉末状,提取总mRNA,采用实时荧光RT--PCR定量检测大鼠肺组织匀浆中肺血管Kv1.5mRNA的表达。 【结果】1.与对照组相比,分流组大鼠mPAP显著增高(21.7±0.4 vs.14.6±0.2,P<0.01),右室重量/(左室+室间隔)重量[RV/(LV+S)]比值也显著增高(0.33±0.01 vs.0.27±0.01,P<0.01),并且分流组大鼠肺小血管肌化程度显著增强,肺中、小肌型动脉相对中膜厚度(RMT)显著增加(27.12±0.97 vs.13.29±0.29,P<0.01)。2.与分流组相比,分流+西地那非组mPAP显著降低(15.6±0.3 vs.21.7±0.4,P<0.01),RV/(LV+S)比值显著低于分流组(0.28±0.01vs.0.33±0.01,P<0.01),并且肺中、小肌型动脉相对中膜厚度(RMT)显著降低(13.53±0.38 vs.27.12±0.97,P<0.01)。3.与对照组相比,分流+西地那非组大鼠的mPAP差异无显著性意义(15.6±0.3 vs.14.6±0.2,P>0.05),RV/(LV+S)比值差异无显著性意义(0.28±0.01 vs.0.27±0.01,P>0.05),肺中、小肌型动脉相对中膜厚度(RMT)差异无显著性意义(13.53±0.38vs.13.29±0.29,P>0.05)。4.与对照组相比,分流组大鼠肺血管Kv1.5的mRNA表达水平显著降低(9.83±0.49 vs.3.02±0.31,P<0.01);与分流组相比,枸橼酸西地那非可上调高肺血流肺动脉高压大鼠肺血管Kv1.5的mRNA表达水平,分流+西地那非组大鼠肺血管Kv1.5的mRNA表达水平显著升高(3.04±0.31 vs.9.83±0.49,P<0.01);而对照组和分流+西地那非组大鼠的Kv1.5mRNA表达水平差异无显著性意义(3.02±0.31 vs.3.04±0.31,P>0.05)。 【结论】 1.大鼠腹主动脉-下腔静脉分流后形成高肺血流肺动脉高压和发生肺血管重构。 2.长期口服西地那非显著逆转大鼠高肺血流肺动脉高压和肺血管重构。 3.高肺血流肺动脉高压大鼠肺血管Kv1.5 mRNA的表达水平显著下降,而西地那非显著上调高肺血流肺动脉高压大鼠肺血管Kv1.5mRNA的表达。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 杨秀春,崔炜;西地那非在肺动脉高压中的应用[J];心血管病学进展;2005年04期
2 吴文汇;荆志成;;西地那非治疗肺动脉高压的研究[J];临床药物治疗杂志;2011年01期
3 徐国焱;;西地那非可作为长期类前列腺素治疗的重症肺动脉高压患者的有效联合治疗手段[J];中华男科学杂志;2008年04期
4 张晓艳;李明阳;王建昌;魏璇;刘波;李娟;;西地那非治疗肺动脉高压所致终末期右心衰竭并长期存活1例[J];临床心血管病杂志;2008年09期
5 林录珠;陈海宇;柯秋晴;;西地那非治疗78例肺动脉高压患者的疗效观察[J];华西药学杂志;2011年01期
6 刘浩;关勤;刘志勇;;西地那非对肺动脉高压大鼠肺动脉压力影响的实验研究[J];现代医学;2006年03期
7 高伟华;常忠路;;西地那非对慢性低氧性肺动脉高压大鼠NO、NOS的作用[J];医学信息(内·外科版);2009年11期
8 许玫;;不同剂量西地那非对肺动脉高压和先天性心脏病患儿血流动力学和换气功能的影响[J];现代泌尿外科杂志;2008年02期
9 徐敬;;西地那非对复杂性肺动脉瓣闭锁合并肺动脉高压的疗效观察[J];中国男科学杂志;2008年05期
10 戚继荣;莫绪明;;西地那非治疗先心病肺动脉高压的研究进展[J];实用临床医药杂志;2009年07期
11 饶海英;董慧春;张秀霞;;西地那非控制小儿先天性心脏病术后持续性肺动脉高压的护理[J];海峡药学;2009年10期
12 梁新亮;卢厚新;刘煜昊;张传军;;西地那非联合贝前列素治疗先天性心脏病并肺动脉高压的疗效观察[J];中国药房;2011年34期
13 赵晖;冯德广;徐成阳;林彬;;西地那非治疗先天性心脏病合并重度肺动脉高压[J];中国实用医药;2009年14期
14 郭建明;何玲;俞波;王君庆;;枸橼酸西地那非成功抢救新生儿持续肺动脉高压1例[J];南昌大学学报(医学版);2010年11期
15 王海燕;张继友;金宁;;前列地尔联合西地那非治疗肺动脉高压的疗效观察[J];广州医药;2011年04期
16 蒋雷服;殷凯生;;西地那非治疗肺动脉高压的研究进展[J];国际内科学杂志;2007年04期
17 曾嵘;庄建;岑坚正;;西地那非与前列腺素E_1治疗猪肺动脉高压[J];岭南心血管病杂志;2007年03期
18 赵献明;许春平;曾波;杜国勇;王晓冬;;阿托伐他汀联合西地那非在慢性阻塞性肺疾病相关肺动脉高压患者的临床观察[J];医学信息(中旬刊);2010年10期
19 顾虹;卓玲;李强强;刘海菊;刘天洋;郭保静;张陈;;西地那非在儿童先天性心脏病相关性肺动脉高压中的应用[J];心肺血管病杂志;2011年03期
20 皇甫卫忠;付秀华;;西地那非治疗慢性阻塞性肺疾病肺动脉高压的疗效研究[J];内蒙古医学院学报;2011年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 庞玉生;韩玉兰;;电压门控性钾通道在大鼠高肺血流性肺动脉高压中的作用[A];中华医学会第十五次全国儿科学术大会论文汇编(上册)[C];2010年
2 胡蕾;谈林华;林隆;何小军;范佳杰;;西地那非逆转高肺血流肺高压大鼠肺血管重构和上调肺血管Kv1.5mRNA表达[A];2009年浙江省胸心外科学学术年会论文汇编[C];2009年
3 解卫平;崔文玉;龙超良;胡刚;汪海;;埃他卡林对肺动脉高压的影响及其作用机制研究[A];第九届全国心血管药理学术会议论文集[C];2007年
4 黄飞琼;王旭;杨菊仙;张燕搏;贺彦;张雅娟;;西地那非在小儿先心病术后肺动脉高压中的疗效[A];中华医学会第七次全国胸心血管外科学术会议暨2007中华医学会胸心血管外科青年医师论坛论文集心血管外科分册[C];2007年
5 刘志勇;刘浩;关勤;;西地那非对肺动脉高压大鼠肺动脉压力影响的实验研究[A];中华医学会第七次全国胸心血管外科学术会议暨2007中华医学会胸心血管外科青年医师论坛论文集心血管外科分册[C];2007年
6 刘坤申;刘超;籍振国;刘刚;;肺动脉高压治疗的循证医学证据[A];中华医学会心血管病学分会第八次全国心血管病学术会议汇编[C];2006年
7 李梦涛;曾小峰;王迁;赵岩;张奉春;唐福林;董怡;;西地那非降低结缔组织病继发肺动脉高压的临床研究[A];第十届全国风湿病学学术会议论文集[C];2005年
8 张玉顺;;肺动脉高压治疗进展[A];中华医学会心血管病学分会第十次全国心血管病学术会议汇编[C];2008年
9 姚允泰;李立环;;肺动脉高压患者行心脏手术的围术期处理[A];2008年中华医学会全国麻醉学术年会论文汇编[C];2008年
10 安舟;;波生坦药理及临床使用[A];浙江省医学会呼吸系病分会成立三十周年庆典活动暨2008年呼吸病学学术年会论文汇编[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 卢献灵;西地那非治疗肺动脉高压前瞻性多中心临床研究[D];中国协和医科大学;2010年
2 孙云娟;肺动脉高压靶向药物治疗与预后的研究[D];北京协和医学院;2012年
3 曾伟杰;肺动脉高压临床治疗与预后的研究[D];北京协和医学院;2011年
4 何兵;药物治疗肺动脉高压随机对照实验的Meta分析[D];武汉大学;2011年
5 李晓晖;骨形成蛋白信号通路在肺动脉高压血管重构中的作用及机制研究[D];中南大学;2011年
6 张洪亮;肺动脉高压的实验与临床研究[D];中国协和医科大学;2010年
7 王骁智;先天性室间隔缺损伴肺动脉高压新致病机制的初步研究[D];南京医科大学;2012年
8 泮思林;三氧化二砷联合自体内皮前体细胞移植治疗肺动脉高压的实验研究[D];青岛大学;2012年
9 金强;eNOS基因转移联合西地那非对大鼠低氧性肺动脉高压的预防作用[D];中国医科大学;2007年
10 张雅娟;动脉调转术围术期危险因素分析及波生坦治疗术后肺动脉高压临床研究[D];中国协和医科大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 胡蕾;西地那非逆转高肺血流肺高压大鼠肺血管重构和Kv1.5mRNA表达的机制[D];浙江大学;2008年
2 关英霞;西地那非治疗肺动脉高压的临床研究[D];昆明医学院;2009年
3 真娟;西地那非治疗COPD合并肺动脉高压25例临床分析[D];吉林大学;2011年
4 廖发荣;西地那非影响野百合碱所致大鼠肺动脉高压的机制[D];广西医科大学;2007年
5 刘浩;西地那非对肺动脉高压大鼠肺动脉压力影响的实验研究[D];东南大学;2006年
6 童凡;西地那非治疗小儿先心病术后肺动脉高压的早期临床疗效研究[D];浙江大学;2005年
7 任建立;体外循环对先天性心脏病伴肺动脉高压婴幼儿循环内皮祖细胞的影响[D];山西医科大学;2011年
8 苏梦亚;妊娠合并肺动脉高压疾病的诊疗进展[D];河北医科大学;2009年
9 王黎春;血管内皮生长因子(VEGF)与先天性心脏病肺动脉高压的相关性研究[D];大连医科大学;2010年
10 王海雄;血清内皮抑素水平与先心病肺动脉压关系的探讨[D];中南大学;2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 本报记者 慕欣;《2010年中国肺动脉高压专家共识》将发布[N];医药经济报;2010年
2 许延庆 记者 韩雪;北方肺动脉高压峰会论坛举行[N];黑龙江日报;2010年
3 麦容;安立生坦为肺动脉高压治疗提供新选择[N];中国医药报;2011年
4 伊遥 编译;肺动脉高压药物研发竞争激烈[N];中国医药报;2011年
5 曹丽;西地那非可治疗肺动脉高压[N];中国医药报;2004年
6 ;万艾可有望治疗肺动脉高压[N];医药经济报;2004年
7 北京协和医院呼吸内科教授 陆慰萱 秦岭整理;肺动脉高压诊治五误区[N];健康报;2010年
8 伊遥;肺动脉高压药全球临床试验布局[N];医药经济报;2011年
9 ;首个口服肺动脉高压药获准[N];医药经济报;2001年
10 吴刘佳;通过调节信号通路可抑制低氧肺动脉高压[N];中国医药报;2009年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978