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抗人巨细胞病毒gBn1抗体的制备及鉴定

陈晓明  
【摘要】: 研究背景: 人巨细胞病毒在全世界普遍存在,临床症状主要发生于免疫系统发育不全或严重的免疫力缺乏患者。其包膜糖蛋白B(gB)在病毒感染及诱导机体免疫反应中起重要作用,其中gBn1型是主要的致病型之一,在我国的HCMV感染者中占有明显优势。 研究目的: 制备能敏感且特异地识别HCMV gBn1型病毒株的抗体,为今后临床检测HCMV gBn1提供物质基础,并为HCMV疫苗的制备及HCMV的基础研究提供了有力保障。 实验方法: 根据GenBank公布的序列(M60929),利用计算机辅助设计,确定并人工合成gBn1抗原多肽,并用Keyhole Limpet Hemocyanin(KLH)交联以增强gBn1抗原多肽的免疫原性。将交联KLH的gBn1抗原肽免疫新西兰兔(经初次免疫和四次加强免疫)后获取免疫兔血清,亲和纯化法纯化兔血清中抗gBn1抗体。采用直接ELISA法、免疫细胞化学染色法、Western-blot免疫沉淀法鉴定抗gBn1抗体的效价、反应的特异性和敏感性。 实验结果: ELISA法、抗原交叉反应等实验显示,抗gBn1抗体能够特异地识别HCMVTowne株(gBn1型),制备的抗体效价1:64000,且与其它型别的HCMV(AD169株及gBn3株)不发生反应。免疫细胞化学染色法鉴定结果显示抗gBn1型抗体的特异性与PCR测定gBn1型基因型的结果符合,而且与其他两型(gBn2型和gBn3型)无交叉反应。以HCMV Towne临床分离株、HCMV AD169病毒株、HCMV gBn3临床分离株和正常细胞株为抗原,纯化的抗gBn1抗体作为一抗进行Western blot分析显示,抗gBn1抗体与Towne株的制备蛋白反应后在相对分子质量约110KD处出现1条清晰条带,符合HCMV gB的分子量。说明所制备的抗体可识别含有合成多肽相同片断的HCMV,即gBn1型HCMV,而不识别其它型别的病毒株,证明抗gBn1抗体具有良好的特异性。 结论: 本研究制备的抗HCMV gBn1抗体能敏感且特异地识别HCMV gBn1型病毒株。该抗体在今后HCMV感染的诊断、治疗、病毒的结构功能研究以及抗体分析等方面具有良好的应用前景。


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