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多重耐药菌消毒剂抗性和精氨酸代谢移动元件研究

皮博睿  
【摘要】: 研究目的 1.明确我国临床分离的鲍曼不动杆菌对消毒剂的敏感性,尤其是亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌对消毒剂的敏感性。 2.筛选消毒剂敏感性下降菌株,揭示鲍曼不动杆菌消毒剂抗性机制。 材料和方法 第1章:收集我国16个城市25家医院700株临床分离的鲍曼不动杆菌(2004年12月-2005年12月),采用琼脂稀释法测定苯扎氯铵、葡萄糖醛酸氯已定和三氯生三种消毒剂最低抑菌浓度(MIC),初步评估我国临床分离的鲍曼不动杆菌对这三种消毒剂的敏感性,并比较三种消毒剂对亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌(IRAB)和亚胺培南敏感鲍曼不动杆菌(ISAB)的MIC是否存在差异。 第2章:进一步根据克隆分层随机挑选21株不同克隆的IRAB,采用悬液定量杀菌试验测定三种消毒剂对不同克隆IRAB的杀灭效果,综合MIC和杀菌试验结果比较三种消毒剂对不同克隆IRAB的杀灭作用。 第3章:在第一部分研究基础上筛选出20株三氯生敏感性下降菌株(MIC>MIC_(90)),采用琼脂稀释法测定阿米卡星、左氧氟沙星、四环素、亚胺培南四种抗菌药物MIC,比较三氯生敏感菌株和敏感性下降菌株抗菌谱有无差异;分别添加两种外排泵抑制剂(CCCP和PAβN),测定其对三氯生和四种抗菌药物的MIC有无影响;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行同源性分析;采用PCR和双脱氧核苷酸测序检测fabI,基因突变;采用实时定量逆转录PCR检测fabI,基因、外排泵adeB、abeM和adeJ基因表达水平。 研究结果 第1章:(1)苯扎氯铵、葡萄糖醛酸氯已定和三氯生对临床分离的700株鲍曼不动杆菌的MIC远远低于消毒规范中规定的消毒剂临床使用浓度。(2)IRAB葡萄糖醛酸氯已定和三氯生MIC几何平均值高于ISAB,但苯扎氯铵MIC几何平均值无差异,反映出IRAB存在对葡萄糖醛酸氯已定和三氯生耐受的潜在可能,其临床意义有待第2章进一步采用悬液定量杀菌试验来评估。 第2章:(1)苯扎氯铵、葡萄糖醛酸氯已定和三氯生(临床使用浓度)能够有效杀灭不同克隆的IRAB,未发现临床耐药的情况;浓度是影响消毒剂杀灭效果的重要因素。(2)MIC结果表明,F克隆菌株对苯扎氯铵和葡萄糖醛酸氯已定敏感性有所下降,C克隆菌株对三氯生敏感性有所下降;悬液定量杀菌试验结果表明,苯扎氯铵、葡萄糖醛酸氯已定和三氯生对6个不同克隆IRAB及散发IRAB的杀灭效果均无显著差异。 第3章:fabI基因Gly93Ser突变引起鲍曼不动杆菌对三氯生高水平耐受(MIC≥4mg/L),fabI高表达导致三氯生低水平耐受(MIC=1-2 mg/L),外排泵与三氯生耐受的关系仍待进一步研究。 结论 1.目前我国临床分离的鲍曼不动杆菌对消毒剂敏感性较好,严格按照消毒规范操作能够有效杀灭我国临床分离的鲍曼不动杆菌。因此,合理规范的消毒隔离工作是有效控制鲍曼不动杆菌流行的必要条件之一。 2.由于IRAB(尤其是某些克隆)存在对消毒剂耐受的潜在可能,有必要对IRAB消毒剂敏感性进行监测。 3.鲍曼不动杆菌能够通过基因突变和高表达降低对三氯生的敏感性,有必要规范三氯生的使用,并监测其敏感性。 研究目的 1.明确社区获得金黄色葡萄球菌的致病基因ACME-arcA在甲氧西林耐药溶血葡萄球菌(MRSH)中的分布情况。 2.研究ACME-arcA基因阳性菌株的表型特征和分子遗传学特征。 研究方法 收集我院2002年4月-2003年4月住院患者临床标本分离的88株MRSH。对ACME-arcA基因、arcA固有基因进行PCR扩增和测序,采用MEGA软件进行系统进化分析。采用K-B琼脂扩散法比较ACME-arcA基因阳性菌株和阴性菌株对10种抗菌药物的耐药性是否存在差异。采用PFGE对ACME-arcA基因阳性菌株进行同源性分析。采用PCR对ACME-arcA基因阳性菌株进行SCCmec分型。 结果 42株MRSH菌株ACME-arcA基因阳性,PFGE将其分为13个型。ACME-arcA基因阳性菌株和阴性菌株对抗菌药物的耐药性没有差异。ACME-arcA基因、arcA固有基因系统进化分析显示,MRSH的arcA固有基因和金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌的ACME-arcA基因的亲缘关系更近。本研究在ACME-arcA基因阳性菌株中发现整合酶基因ccr的一种新亚型(ccrAB_(SHP))。42株ACME-arcA基因阳性菌株,8株携带V型SCCmec,8株携带C1型mec基因复合体和ccrAB_(SHP),剩余26株携带C型mec基因复合体和未分型ccr。 结论 首次在溶血葡萄球菌中发现ACME-arcA基因,因其有较高的阳性率、遗传多样性,经系统进化分析,推测ACME可以在MRSH中广泛移动,并由MRSH转移至金黄色葡萄球菌。


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